$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
فئة
1. فحص الإنتاجية العالية لتثبيط النمو (HTS)
ملاحظة: يتم تقييم النشاط المثبط للنمو للعوامل المضادة للسرطان ضد عضيات الورم المشتقة من المريض (PDOs) عن طريق قياس محتوى ATP داخل الخلايا ، كما هو موضح في الشكل 1. يتم تنفيذ هذه الخطوة باستخدام مجموعة مقايسة جدوى الخلية المتاحة تجاريا (انظر جدول المواد).
- في اليوم 0 ، قم بزراعة PDOs (على سبيل المثال ، RLUN007) في قوارير حتى تتوفر أعداد كافية من مجموعات الخلايا للمقايس. قبل يوم واحد من البذر ، انقل معلق PDO من قارورة 75 سم2 إلى أنبوب 15 مل وجهاز طرد مركزي عند 200 × جم لمدة دقيقتين لقياس حجم حبيبات PDO. بعد ذلك ، أعد تعليق حبيبات PDO في 15 مل من الوسط الطازج وانقلها مرة أخرى إلى قارورة 75 سم2. زراعة الخلايا عند 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون2.
ملاحظه: يعتمد حجم حبيبات PDO المطلوب على معدل تخفيف كل PDO وعدد الألواح المكونة من 384 بئر المستخدمة في الفحص. بالنسبة RLUN007 ، فإن 200 ميكرولتر من حجم حبيبات الخلية ضروري للبذر في عشر ألواح بئر 384.
- في اليوم 1 (24 ساعة بعد تغيير الوسط) ، قم بفرم PDOs باستخدام معدات تجزئة الخلايا وتشتيتها (انظر جدول المواد) باستخدام حامل مرشح يحتوي على مرشح شبكي 70 ميكرومتر. ثم قم بتخفيف 15 مل من نظام التعليق PDO بمقدار 10x. قم بزرع 40 ميكرولتر من تعليق PDO إلى 384 بئرا من ألواح كروية منخفضة للغاية (مستديرة القاع) (انظر جدول المواد) باستخدام موزع تعليق الخلية (انظر جدول المواد).
ملاحظه: لفرم مجموعات الخلايا ، يوصى باستخدام معدات تجزئة وتشتت الخلايا المتاحة تجاريا (انظر جدول المواد).
- بعد 24 ساعة من البذر (اليوم 2) ، عالج PDOs ب 0.04 ميكرولتر من محاليل عامل الاختبار في نطاقات تركيز نهائية من 20 ميكرومتر إلى 1.0 نانومتر (10 تخفيفات تسلسلية) باستخدام معالج سائل (انظر جدول المواد).
- في اليوم 8 (144 ساعة بعد العلاج بمادة الاختبار) ، أضف كاشف قياس ATP داخل الخلايا إلى آبار الاختبار. امزج الألواح باستخدام الخلاط واحتضانها لمدة 10 دقائق عند 25 درجة مئوية. قم بقياس محتوى ATP داخل الخلايا كتلألؤ باستخدام قارئ لوحة (انظر جدول المواد).
- لحساب قابلية الخلية للبقاء ، قسم كمية ATP في آبار الاختبار على تلك الموجودة في آبار التحكم التي تحتوي على السيارة ، مع طرح الخلفية. لحساب معدل النمو على مدى 6 أيام ، اقسم كمية ATP في آبار التحكم في السيارة على تلك الموجودة في آبار التحكم في السيارة بعد 24 ساعة من البذر.
- احسب قيم التركيز المثبط بنسبة 50٪ (IC50) والمساحة تحت المنحنى (AUC) من منحنيات استجابة الجرعة باستخدام برنامج تحليل البيانات البيولوجية (انظر جدول المواد). عامل Z هو معلمة بلا أبعاد تتراوح من 1 (فصل لا نهائي) إلى <0 ، تعرف على أنها Z = 1 - (3σc + + 3σc-) / |μc + - μc- |، حيث σc + و σc- و μc + و μc- هي الانحرافات المعيارية (σ) والمتوسطات (μ) لعناصر التحكم المرتفعة (c +) والمنخفضة (c−) ، على التوالي.
