مقالة منهجية

فحص المراسل الحيوي: تقنية حساسة تستخدم نظام مراسل الإضاءةالأحيات الحيوية للكشف عن الأجسام المضادة ل SARS-CoV-2

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Rezaei، R. et al.، الكشف عن الأجسام المضادة لمجال ربط مستقبلات SARS-CoV-2 باستخدام مراسل حيوي قائم على HiBiT. J. Vis. Exp. (2021)

في هذا الفيديو ، نعرض الاختبار المستند إلى نظام HiBit-RBD bioreporter للكشف عن الأجسام المضادة المعادلة ل SARS-CoV-2. يستهدف هذا النظام مجال RBD الفيروسي باستخدام نظام مراسل Bioluminescent يحتوي على HiBiT المدمجة في مجال RBD.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الكشف عن الأجسام المضادة ل RBD بفحص سريع وحساس

  1. مقايسة الكشف عن الأجسام المضادة HiBiT-RBD
    1. قم بإعداد المراسل الحيوي HiBiT-RBD.
      ملاحظه: يوصى باستخدام المادة الطافية في الفحص التالي لأنها أسهل في الجمع وتحتوي على النسخة الناضجة من البروتين. علاوة على ذلك ، يحتوي المحللة على العديد من البروتينات الأخرى التي يمكن أن تتداخل مع تفاعل الأجسام المضادة HiBiT-RBD.
    2. اجمع بين 50 ميكرولتر من المادة الطافية المحتوية على HiBiT-RBD مع 1 ميكروغرام من الجسم المضاد التجاري SARS-CoV-2-RBD في أنبوب دقيق سعة 1.5 مل. أضف 20 ميكرولتر من البروتين المرتبط بالغلوبولين المناعي (بروتين G) إلى المحلول. قم برفع الحجم الإجمالي إلى 300 ميكرولتر عن طريق إضافة PBS.
      ملاحظه: يمكن تقليل الحجم الكلي للخليط إلى 150 ميكرولتر ، ولا ينصح بانخفاض الأحجام الإجمالية لأنه قد يؤدي إلى اختلاط غير كاف للأجسام المضادة مع المراسل الحيوي.
    3. احتضان الأنبوب (الأنبوب) على شاكر أو دوار أنبوب لمدة 30 دقيقة. جهاز طرد مركزي عند 12,000 × جم لمدة 30 ثانية ، وتخلص من المادة الطافية واغسلها باستخدام PBS. كرر العملية ثلاث مرات لإزالة HiBiT-RBD المجاني. أعد التعليق في 50 ميكرولتر من PBS وانقله إلى لوحة 96 بئر.
    4. أضف 50 ميكرولتر من 1x LgBiT وانتظر لمدة 5 دقائق. ثم أضف 50 ميكرولتر من ركيزة 1x NanoLuc. اقرأ إشارة الإنارة على الفور باستخدام مقياس الإضواء.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات غسالة مغناطيسية محمولة Bio-Plex بيو راد 171020100 جهاز نظام فحص لوسيفيراز ثنائي Glo بروميجا E2940 طقم 100 مل ال جي بي تي بروميجا N3030 طقم الفحص بيرس بروتين G الخرز المغناطيسي ثيرمو فيشر العلمي 88848 تحليل SARS-CoV-2 (2019-nCoV) الجسم المضاد المحايد للسبايك ، ماب الفأر سينو بيولوجي 40592-مم 57 تحليل قارئ الصفيحة الدقيقة Synergy Mx بيوتك 96 بئر قارئ لوحة مقياس الإضاءة

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

HiBiT RBD RBD G LgBiT

مقالات ذات صلة