مقالة منهجية

اختبار الأجسام المضادة المعادلة للخلايا AAV: تقنية قياس الألوان للكشف عن الأجسام المضادة المعادلة ضد فيروسات معينة مرتبطة بالغدة في المصل

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Bass-Stringer، S.، et al. طريقة خطوة بخطوة للكشف عن الأجسام المضادة المعادلة ضد AAV باستخدام اختبار قائم على الخلايا اللونية. J. Vis. Exp. (2021)

في هذا الفيديو ، نوضح مقايسة لونية في المختبر للكشف عن وجود أجسام مضادة معادلة ضد ناقلات النمط المصلي للفيروس المؤتلف المرتبط بالفوسفاتيز 6 (rAAV6) في عينات مصل الأغنام. يستخدم الاختبار التفاعل بين AAV الذي يشفر جين الفوسفاتيز القلوي المشيمي البشري والركيزة الخاصة به لتوليد منتج أرجواني غير قابل للذوبان.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

يتم توفير نظرة عامة تخطيطية على بروتوكول الفحص في الشكل 1.

< p class = "jove_title" >1. التحضير الأولي

  1. للتقييم في الأغنام: اجمع الدم في أنابيب منشطة جلطة فاصل المصل سعة 8 مل (انظر جدول المواد) ، اترك عينة الدم في درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة 20-30 دقيقة ، وبعد ذلك ، قم بالدوران عند 2,100 × جم لمدة 15 دقيقة. المادة الطافية الصافية التي تتشكل في الجزء العلوي من الأنابيب هي المصل. Aliquot الطور المائي الصافي في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة وتخزينها عند -80 درجة مئوية.
    ملاحظه: يظل المصل عند -80 درجة مئوية مستقرا لمدة ~ 5 سنوات. تم جمع الدم من الوريد السباتي باستخدام إبرة 16 جم (قطع الطرف) وحقنة من الواعية.
  2. قم بتسخين مصل الأبقار الجنينية المعطل (FBS) عن طريق وضعه في حمام مائي عند 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة ، وقم بالدوران بشكل متقطع. للدقة ، ضع مقياس حرارة في زجاجة ثانية تحتوي على حجم مكافئ من الماء وأضفه إلى الحمام الحراري في نفس وقت زجاجة FBS. ابدأ التوقيت عندما يصل مقياس الحرارة إلى 56 درجة مئوية.
  3. استخدم تقنية التعقيم المناسبة وممارسة زراعة الخلايا لجميع الخطوات اللاحقة التي يتم إجراؤها في غطاء زراعة الخلايا. رش 70٪ إيثانول على جميع الأشياء والغطاء قبل الاستخدام ونظفه باستخدام هيبوكلوريت الصوديوم 1٪ عند الانتهاء.
  4. اصنع Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) من Dulbecco عن طريق الجمع بين نسبة عالية من الجلوكوز (4.5 جم / لتر) و DMEM (89٪) مع FBS المعطل بالحرارة (10٪) والبنسلين ستربتومايسين (1٪). اجمع وقم بالتصفية باستخدام نظام ترشيح فراغي معقم (حجم المسام 0.22 ميكرومتر ، غشاء بولي إيثر سلفون) (انظر جدول المواد). قم بتخزين DMEM الكامل ملفوفا بورق الألمنيوم عند 4 درجات مئوية.
  5. قم بإنشاء خلايا HT1080 (انظر جدول المواد) والمرور في قارورة مربعة 75 سم2. إنشاء مخزونات متعددة من الخلايا المجمدة. لا تستخدم الخلايا بعد 20 مقطعا لأن المزيد من المرور قد يؤثر على نتائج الفحص.
< p class = "jove_title" >2. اليوم 1 - طلاء الخلايا

  1. مرور خلايا HT1080 عندما تصل إلى ~ 80٪ التقاء.
  2. DMEM كامل مسخن مسبقا (محضر في الخطوة 1.4) ، 0.05٪ تريبسين-EDTA ، و 1x محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) إلى 37 درجة مئوية في حمام مائي. قم بإزالة وسط النمو من الخلايا التي تم مرورها باستخدام نظام الشفط.
    ملاحظه: تستخدم جميع التطلعات في هذا البروتوكول نظام تفريغ مع أنبوب متصل بماصة مصلية معقمة سعة 5 مل.
  3. اغسل الخلايا في 10 مل من التسخين المسبق (37 درجة مئوية) 1x PBS والخلايا التربسينية لمدة 3-4 دقائق في 4 مل من 0.05٪ trypsin-EDTA الدافئ مسبقا لفصل الخلايا عن القارورة.
  4. قم بتعطيل التربسين عن طريق إضافة 6 مل من DMEM الكامل المسخن مسبقا وماصة الخلايا في أنبوب سعة 50 مل. احسب عدد الخلايا القابلة للحياة وتركيزها باستخدام مقياس كثافة الدم وطريقة استبعاد التريبان الأزرق.
  5. تمييع الخلايا إلى تركيز 1 × 105 خلايا / مل في DMEM كامل مسخن مسبقا. قم بزرع 100 ميكرولتر من الخلايا / البئر في صفائح شفافة ذات قاع مسطح مكون من 96 بئرا (1 × 104 خلايا لكل بئر). احتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون (CO2) بين عشية وضحاها لمدة 16-22 ساعة.

3. اليوم 2 - إصابة الخلايا

  1. قم بإزالة اللوحة / الألواح من الحاضنة واستخدم مجهرا ضوئيا للتأكد من أن الخلايا مشتتة بالتساوي داخل الآبار وأن التقاء هو ~ 50٪. إذا لم تكن الخلايا ضمن نطاق التقاء 45٪ -55٪ ، كرر بروتوكول "اليوم الأول" واضبط تركيز الخلية الأولي وفقا لذلك.
  2. توليد تخفيفات تسلسلية لعينات المصل ذات الأهمية في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة سعة 1.5 مل باستخدام DMEM كامل مسخن مسبقا كمخفف. يوضح الجدول 1 توليد سلسلة التخفيف للعينات الثلاثية.
    1. لإجراء الاختبار في ثلاث نسخ ، قم بإعداد 7.5 × 106 جينومات متجهة (vg) / ميكرولتر من محلول العمل ل AAV6-hPLAP (انظر جدول المواد) عن طريق تخفيف محلول مخزون الفيروسات في 1x PBS.
    2. أضف 66 ميكرولتر من محلول عمل الفيروس 7.5 × 106 vg / μL إلى كل أنبوب يحتوي على 264 ميكرولتر من تخفيف المصل / الوسائط (330 ميكرولتر من الحجم الكلي / التخفيف ، انظر الجدول 1).
      ملاحظه: هذا اختبار قوي لا يتطلب ظروفا ثقافية مثالية. ومع ذلك ، لتقدير الكمية بدقة والتأكد من أن كل عملية فحص موثوقة ، من الضروري تضمين ما يلي: (1) التحكم في الفيروسات والوسائط فقط ، (2) عنصر تحكم بالوسائط فقط ، و (3) عينة تحكم إيجابية NAb على جميع اللوحات في ظل نفس الظروف التجريبية. الحجم الموصوف (330 ميكرولتر) يمثل عينات ثلاثية + 10٪ من خليط المصل والفيروسات. يوصى بشدة بإجراء التكرارات من أجل التحديد الدقيق لنشاط التحييد.
  3. امزج تخفيفات الفيروس / المصل عن طريق سحب العينات وضع الأنابيب التي تحتوي على مخاليط الفيروس / المصل في حاضنة عند 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيدالكربون 2 لمدة 30 دقيقة للسماح بحدوث تحييد محتمل.
  4. ماصة 100 ميكرولتر من خليط الفيروس/المصل لكل بئر على الصفيحة المكونة من 96 بئرا تحتوي على 1 × 104 خلايا/بئر لكل تخفيف.
    ملاحظه: سيؤدي ذلك إلى توليد تركيز فيروسي نهائي يبلغ 15 كيلو فيروسات / تعدد خلايا العدوى (MOI) في كل بئر. يقدم الجدول 2 مثالا على تخطيط لوحة عينة 96 بئرا لتقييم العينات إلى تخفيف 1/512.
  5. لف الصفيحة المكونة من 96 بئرا التي تحتوي على خلايا ومصل و AAV-hPLAP في ورق القصدير وضعها في حاضنة عند 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 طوال الليل لمدة 16-24 ساعة للسماح بدخول AAV إلى الخلايا.

4. اليوم 3 - تثبيت وإضافة الركيزة إلى الخلايا

  1. قم بتسخين كمية من 1x PBS إلى 37 درجة مئوية (~ 25 مل / 96 بئر). قم بتبريد كميات منفصلة من PBS (~ 25 مل / 96 بئر صفيحة) و H2O المقطر المزدوج (DDW ، ~ 25 مل / 96 بئر صفيحة) إلى 4 °C. قم بإذابة حبيبات BCIP / NBT (انظر جدول المواد) في 10 مل من DDW في أنبوب طرد مركزي مخروطي 50 مل عن طريق الدوامة (10 مل تكفي لألواح 2 × 96 جيدا).
  2. قم بشفط الوسائط من آبار الصفيحة المكونة من 96 بئرا باستخدام ماصة مصلية أو ما شابه ذلك متصلة بنظام الشفط القائم على الشفط أو فراغ غطاء الدخان. ضع طرف الماصة المصلية برفق في البئر وقم بإزالة الوسائط مع الحرص على عدم تعطيل الخلايا الملتصقة.
    1. أضف 50 ميكرولتر من RT 4٪ PFA إلى كل بئر باستخدام ماصة. لف الطبق بورق القصدير واتركه في RT لمدة 10 دقائق لإصلاح الخلايا.
      أنذر: بارافورمالدهيد (PFA) هو مادة مسرطنة محتملة وسام من ملامسة الجلد أو العين أو الاستنشاق. تعامل مع غطاء الدخان مع معدات الحماية الشخصية المناسبة بالإضافة إلى قناع الوجه. اصنع 4٪ PFA طازجا مخففا في PBS (~ 7 مل مطلوب لكل لوح 96 بئر).
  3. اغسل الخلايا واستنشاقتها ب 200 ميكرولتر من RT 1x PBS. كرر هذه الخطوة مرتين.
    ملاحظه: تعد الماصة متعددة القنوات خيارا فعالا لخطوات سحب العينات.
  4. ماصة 200 ميكرولتر من PBS الدافئ مسبقا في كل بئر ، لف اللوحة بورق الألمنيوم ، واحتضانها عند 65 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة لتغيير نشاط الفوسفاتيز القلوي الداخلي.
  5. استنشق الآبار وغسل الخلايا ب 200 ميكرولتر من البرودة (4 درجات مئوية) PBS. استنشق مرة أخرى ، واغسله في 200 ميكرولتر من DDW البارد ، واستنشق مرة أخرى.
  6. الماصة 50 ميكرولتر من BCIP/NBT المذاب (المحضرة في الخطوة 4.1) في كل بئر.
  7. لف الطبق بورق القصدير واحتضنه عند RT لمدة 2-24 ساعة < / > ملاحظه: كن متسقا مع وقت الحضانة بين الجري ؛ تسمح المرونة الزمنية للمستخدمين بتصوير الآبار إما في اليوم 3 أو في اليوم التالي.
  8. باستخدام كاميرا المجهر الضوئي ، التقط صورا لكل بئر باستخدام عدسة موضوعية 4x ، مما يضمن استخدام نفس التعريض الضوئي ، والتوازن الأبيض ، وإعدادات الإضاءة باستمرار لجميع المقايسات التي يتم إجراؤها.
    1. ضع كل بئر بشكل متماثل وتأكد من عدم ظهور حواف البئر في الصور. احفظ الصور بتنسيق TIF أو ما شابه.
      ملاحظه: ستختلف الإعدادات المحددة بين المجاهر ، ولكن القياس الكمي سيكون أكثر فاعلية إذا كانت إضاءة الخلفية عالية ومتسقة في جميع أنحاء الآبار (الشكل 1 ب).
< p class = "jove_content" > الجدول 1: أحجام المصل والمخفف المطلوبة لتوليد التخفيفات التسلسلية للمصل في ثلاث نسخ.

تسمية تتالي التخفيف التخفيف 3 × عينة (240 ميكرولتر) + 10٪ حجم عازل (24 ميكرولتر) نسبة المصل: الوسائط التخفيف 1 (D1) 1/2 264 ميكرولتر مصل 264 ميكرولتر وسائط 50:50 التخفيف 2 (D2) 1/4 264 ميكرولتر D1 + 264 ميكرولتر وسائط 25:75 التخفيف 3 (D3) 1/8 264 ميكرولتر D2 + 264 ميكرولتر وسائط 12.5:87.5 التخفيف 4 (D4) 1/16 264 ميكرولتر D3 + 264 ميكرولتر وسائط 6.25:93.75 التخفيف 5 (D5) 1/32 264 ميكرولتر D4 + 264 ميكرولتر وسائط 3.13:96.87 التخفيف 6 (D6) 1/64 264 ميكرولتر D5 + 264 ميكرولتر وسائط 1.56:98.44 التخفيف 7 (D7) 1/128 264 ميكرولتر D5 + 264 ميكرولتر وسائط 0.78:99.22 التخفيف 8 (D8) 1/256 264 ميكرولتر D5 + 264 ميكرولتر وسائط 0.39:99.61 التخفيف 9 (D9) 1/512 264 ميكرولتر D7 + 264 ميكرولتر وسائط 0.2:99.8 التخفيف 10 (D10) 1/2048 132 ميكرولتر D8 + 396 ميكرولتر وسائط 0.05:99.95 التخفيف 11 (D11) 1/8192 132 ميكرولتر D9 + 396 ميكرولتر وسائط 0.01:99.99 التخفيف 12 (D12) 1/32768 132 ميكرولتر D10 + 396 ميكرولتر وسائط 0.003:99.997

الجدول 2: مثال تخطيط لوحة 96 بئرا لتقييم عينات المصل الساذجة في التخفيفات التي تتراوح من 1/2 إلى 1/512. يتم دمج التخفيفات الأعلى في الفحص إذا تم تقييم عينة معروفة بأنها إيجابية ل AAV NAbs (عينات ما بعد الإعطاء) أو إذا كان هناك حاجة إلى عيار أعلى. MO (-C): التحكم في الوسائط فقط. VO (+C): التحكم في الفيروسات والوسائط فقط. mAb: الجسم المضاد وحيد النسيلة ضد AAV (التحكم الإيجابي NAb).

< td style="min-width: 70px;"> serum sample # 1 عينة المصل # 2 عينة المصل # 3 أحادي AB (mAB) ، عناصر التحكم والعينات الإضافية < td style="min-width: 70px;"> 1 2 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">3 < td style="min-width: 70px;">4 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">5 6 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">7 8 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">9 < td style="min-width: 70px;">10 11 12 أ < td style="min-width: 70px;">1/2 < td style="min-width: 70px;">1/2 < td style="min-width: 70px;">1/2 < td style="min-width: 70px;">1/2 < td style="min-width: 70px;">1/2 < td style="min-width: 70px;">1/2 < td style="min-width: 70px;">1/2 < td style="min-width: 70px;">1/2 < td style="min-width: 70px;">1/2 < td style="min-width: 70px;">50 ng
ماب < td style="min-width: 70px;">50 ng
ماب < td style="min-width: 70px;">50 ng
ماب < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;"> < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/4 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/4 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/4 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/4 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/4 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/4 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/4 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/4 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/4 < td style="min-width: 70px;">5 ng
ماب < td style="min-width: 70px;">5 ng
ماب < td style="min-width: 70px;">5 ng
ماب < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;"> درجة مئوية < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/8 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/8 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/8 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/8 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/8 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/8 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/8 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/8 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/8 0.5 نانوغرام
ماب 0.5 نانوغرام
ماب 0.5 نانوغرام
ماب < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">D 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 MO (-C) MO (-C) MO (-C) < td style="min-width: 70px;">E < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/32 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/32 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/32 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/32 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/32 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/32 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/32 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/32 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" >1/32 < td style="min-width: 70px;">VO (+C) < td style="min-width: 70px;">VO (+C) < td style="min-width: 70px;">VO (+C) < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;"> فهرنهايت < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/64 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/64 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/64 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/64 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/64 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/64 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/64 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/64 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/64 Sample
# 1
1/512 Sample
# 1
1/512 Sample
# 1
1/512 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">G < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/256 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/256 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/256 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/256 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/256 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/256 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/256 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/256 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">1/256 Sample
# 2
1/512 Sample
# 2
1/512 Sample
# 2
1/512 < td style="الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل;">H < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" > 1/512 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" > 1/512 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" > 1/512 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" > 1/512 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" > 1/512 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" > 1/512 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" > 1/512 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" > 1/512 < نمط TD = "الحد الأدنى للعرض: 70 بكسل ؛" > 1/512 Sample
# 3
1/512 Sample
# 3
1/512 Sample
> # 3
1/512

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: رسم تخطيطي لبروتوكول فحص NAb. (أ) التمثيل المرئي لمقايسة NAb التي توضح الخطوات الأساسية المتضمنة في بروتوكول الأيام الثلاثة. باختصار ، يتم زراعة الخلايا وطلاءها بين عشية وضحاها. في اليوم التالي ، يتم تحضير التخفيفات المتسلسلة للمصل ، وتحضنها ب AAV ، ثم تحضنها مع الخلايا طوال الليل. في اليوم التالي ، يتم إصلاح الخلايا وغسلها واحتضانها ودمجها مع الركيزة واحتضانها مرة أخرى ، متبوعا ب...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 0.05٪ تريبسين / EDTA جيبكو هاتف: 25300-054 أنبوب الطرد المركزي المخروطي 50 مل صقر 14-432-22 أو ما يعادلها 75 سم2 قوارير مربعة صقر 353136 أو ما يعادلها 96 لوحة ذات قاع مسطح جيدا صقر 353072 AAV6-CMV-hPLAP ناقلات مختبر أبحاث العضلات وعلاجاتها (جامعة ملبورن ، أستراليا) يمكن توفير AAV6-CMV-hPLAP عند الطلب. رقائق الألومنيوم الجسم المضاد أحادي النسيلة للفأر المضاد للجسيمات السليمة (ADK6) بروجين 610159 الجسم المضاد أحادي النسيلة للتحكم الإيجابي BCIP / NBT سيغما فاست ب 5655 خزانة سلامة زراعة الخلايا والأنسجة الماصة الإلكترونية 5 و 10 مل إدراج مخطط مصل الأبقار الجنينية جيبكو 10099-141 مقياس الدم ارتفاع نسبة الجلوكوز Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) جيبكو 11965118 خلايا HT1080 ATCC حاضنه 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيدالكربون 2 مجهر ضوئي مع كاميرا قادرة على التقاط الصور باستخدام عدسة موضوعية 4x فرن لحضانة 65 درجة مئوية بارافورمالدهيد ميرك 30525-89-4 حمام مائي البنسلين ستربتومايسين جيبكو 15140-122

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

AAV6 HT1080 BCIP NBT

مقالات ذات صلة