مقايسة التألق المناعي للكشف عن تلف الحمض النووي بوساطة PM2.5 في أجنة الأسماك

الملخص

المصدر: هوانغ ، واي ، وآخرون. استخدام التألق المناعي للكشف عن تلف الحمض النووي الناجم عن PM_2.5 في قلوب جنين أسماك الزرد. J. Vis. Exp. (2021).

يوضح هذا الفيديو فحصا قائما على التألق المناعي شديد الحساسية للكشف عن الضرر التأكسدي الناجم عن PM_2.5 في قلوب أجنة أسماك الزرد عن طريق قياس مستويات 8-OHdG و γH2AX ، والتي تشير إلى تلف الحمض النووي وفواصل الحمض النووي المزدوجة ، على التوالي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة

1. PM_2.5 أخذ العينات واستخراج المركبات العضوية

ملاحظة: تم جمع PM_2.5 في منطقة حضرية في سوتشو ، الصين ، من 1 إلى 7 أغسطس 2015 ، كما هو موضح سابقا.

1. اخبز مرشحات غشاء الكوارتز مقاس 47 مم في فرن دثر 500 درجة مئوية لمدة ساعتين لإزالة المكونات العضوية.
2. ضع مرشحا في جهاز أخذ العينات PM_2.5 لمدة 24 ساعة من أخذ العينات دون انقطاع.
3. قم بإزالة الفلتر وجففه لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
4. حدد كمية المرشح باستخدا....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 8-OHdG الأجسام المضادة سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية ، الولايات المتحدة الأمريكية SC-66036 الجسم المضاد الأولي الميزان التحليلي سارتوريوس ، الصين BSA124S جيش صرب البوسنه Solarbio ، بكين ، الصين SW3015 للحظر دابي Abcam ، الولايات المتحدة الأمريكية أب104139 للبقعة النووية. DMSO Solarbio ، بكين ، الصين د8371 المجهر الفلوري أوليمبوس ، اليابان IX73 لتصوير إشارات التألق الماعز المضادة للأرانب IgG Cy3 كارلسباد ، الولايات المتحدة الأمريكية سي دبليو 0159 الجسم المضاد الثانوي الماعز المضادة للأرانب IgG FITC كارلسباد ، الولايات المتحدة الأمريكية RS0003 الجسم المضاد الثانوي ن-أسيتيل-L-سيستين(NAC) Adamas-Beta ، شنغهاي ، الصين 616-91-1 شاكر المداري QILINBEIER ، الصين تي إس-1 بارافورمالدهيد سيجما ، الصين ص 6148 اصنع 4٪ بارافورمالدهيد للتثبيت. محلول ملحي مخزن بالفوسفات HyClone ، الولايات المتحدة الأمريكية SH30256.01 تحضير 0.1٪ توين في PBS للغسيل. جهاز أخذ العينات PM2.5 تيانهونغ ، ووهان ، الصين TH-150C لأخذ عينات PM2.5 دون انقطاع على مدار 24 ساعة. نظام إعادة تدوير الاستزراع المائي HaiSheng ، شنغهاي ، الصين تم الحفاظ على سمك الزرد فيه. مستخرج Soxhlet تشنغ تشياو ، شنغهاي ، الصين BSXT-02 لاستخراج المكونات العضوية. مجهر مجسمة نيكون، كندا SMZ645 لتشريح القلب من أجنة الزرد. تريكايين ميثان سولفونات (MS222) سيجما ، الصين [إ10521] لتخدير أجنة الزرد توين 20 سيجما ، الصين ص 1379 γH2AX الجسم المضاد Abcam ، الولايات المتحدة الأمريكية أب26350 الجسم المضاد الأولي