مقالة منهجية

اختبار لدراسة تأثير مركب الاختبار ضد السمية العصبية بوساطة PolyQ في الديدان

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Wang، Q. et al. ، Caenorhabditis elegans كنظام نموذجي لاكتشاف المركبات النشطة بيولوجيا ضد السمية العصبية بوساطة البولي جلوتامين. J. Vis. إكسب. (2021)

في هذا الفيديو ، نصف طريقة لتقييم التأثير الوقائي العصبي لمركب اختبار ، astragalan ، على بقاء الخلايا العصبية في Caenorhabditis elegans من السمية العصبية بوساطة polyQ. يستخدم الاختبار Caenorhabditis elegans الذي يعبر عن تكرارات polyQ الموسعة بشكل غير طبيعي المدمجة في GFP في الخلايا العصبية ASH لقياس بقاء الخلايا العصبية بعد العلاج المركب للاختبار.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فئة

1. فحص السمية العصبية بوساطة PolyQ

  1. معالجة المطثية ايليجانس بعينات الاختبار
    1. لتحضير الديدان الخيطية لمقايسة السمية العصبية polyQ ، قم بنقل 300-500 يرقات L1 متزامنة من HA759 إلى كل بئر من صفيحة 48 بئرا مع 500 ميكرولتر من وسط S يحتوي على OP50 (OD570 من 0.7-0.8) و 5 مجم / مل من astragalan ؛ عادة ثلاثة آبار مكررة لكل معالجة.
    2. أغلق اللوحة بالبارافيلم واحتضانها عند 15 درجة مئوية و 120 دورة في الدقيقة لمدة 3 أيام.
    3. اجمع الديدان الخيطية عن طريق الطرد المركزي واغسلها 3-5 مرات باستخدام المخزن المؤقت M9. أعد تعليق الديدان الخيطية في المخزن المؤقت M9 لاستخدامها في فحوصات بقاء الخلايا العصبية وتجنبها.
  2. تحضير وسادة الاغاروز
    1. أضف 2 جم من الاغاروز إلى 100 مل من المخزن المؤقت M9 (2٪ ، وزن / حجم) وقم بتسخين محلول الاغاروز في الميكروويف حتى يقترب من الغليان.
    2. قم بتوزيع 0.5 مل من الاغاروز المذاب على وسط شريحة زجاجية مجهرية بسمك 1 مم موضوعة بين قطعتين من ألواح زجاجية بسمك 2 مم. قم بتغطيتها بشريحة أخرى عموديا. بمجرد أن يبرد الاغاروز ويتصلب ، قم بإزالة الشريحة العلوية برفق.
  3. مقايسة بقاء الخلايا العصبية ASH
    1. أضف قطرة من 20 ملي من أزيد الصوديوم على وسادة الاغاروز. انقل 15-20 ديدان خيطية HA759 إلى القطرة لشل حركتها.
    2. ضع غطاء برفق فوق الديدان الخيطية. احتفظ بالشريحة تحت مجهر مضان مزود بكاميرا رقمية. حدد عدسة موضوعية 40x ومرشح FITC للكشف عن الخلايا العصبية ASH إيجابية GFP في منطقة رأس الديدان الخيطية.
    3. حدد أكثر من 50 ديدان خيطية في كل مجموعة بشكل عشوائي لحساب عدد الديدان الخيطية التي تحتوي على خلايا عصبية ASH ثنائية تحمل علامة GFP في منطقة رأسها. احسب معدل بقاء الخلايا العصبية ASH:
      بقاء الخلايا العصبية (٪) = figure-protocol-1
      حيثبقاء N وN الإجمالي هو عدد الديدان الخيطية التي تحتوي على الخلايا العصبية ASH إيجابية GFP والعدد الإجمالي للديدان الخيطية المختبرة في كل مجموعة ، على التوالي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات C. سلالة ايليجانس HA759 rtIs11 [osm-10p :: GFP + osm-10p :: HtnQ150 + dpy-20 (+)] مركز علم الوراثة Caenorhabditis (CGC) https://cgc.umn.edu/strain/HA759 سلالة الإشريكية القولونية 50 ر.ب مركز علم الوراثة Caenorhabditis (CGC) https://cgc.umn.edu/strain/OP50 الكاشف أغاروز الغرب الحيوي هاتف: 111860 أزيد الصوديوم Sinopharm الكاشف الكيميائي المحدودة 80115560 https://www.reagent.com.cn/goodsDetail/5e981aa807664e26af< / > 551e96ff5f07cd معدات لوحة ثقافة الخلية 48 بئر شركة Nest Biotechnology Co.، Ltd. 748001 https://www.cell-nest.com/page94?_l=en&product_id=85 المجهر الفلوري قوانغتشو مايكرو بالرصاص البصرية التكنولوجيا المحدودة إم شوت MF31-LED https://www.mshot.com/article/442.html نظام تصوير عالي المحتوى الأجهزة الجزيئية إيمج إكسبرس بيكو https://www.moleculardevices.com/products/cellular-imaging-systems#High-Content-Imaging أجهزة الطرد المركزي الدقيقة شركة جينات جينيسبيد X1 https://www.genecompany.com/index.php/Home/Goods/goodsdetails/gid/189.html كاميرا مجهرية رقمية قوانغتشو مايكرو بالرصاص البصرية التكنولوجيا المحدودة MS60 https://www.mshot.com/article/677.html المايكرويف شركة ميديا م 1-211 أ https://www.midea.cn/10000/10000000001 بارافيلم م سيجما ألدريتش P7793-1EA https://www.sigmaaldrich.cn/CN/en/product/sigma/p7793?context=product برمجيات برنامج الحصول على الصور وتحليلها الأجهزة الجزيئية ميتا اكسبرس منتجات https://www.moleculardevices.com/ / أنظمة التصوير الخلوي / برامج الاستحواذ والتحليل / Metaxpress

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Caenorhabditis elegans ASH GFP

مقالات ذات صلة