فحص امتصاص الأحماض الأمينية ذات العلامات المشعة لتحديد الامتصاص الخلوي للأحماض الأمينية

الملخص

المصدر: Shen، L.، et al. تقييم استهلاك الأحماض الأمينية في خلايا العظام المستنبتة وأعمدة العظام المعزولة. J. Vis. Exp. (2022).

يوضح هذا الفيديو تقنية في المختبر لتقدير امتصاص الأحماض الأمينية بواسطة الخلايا اللحمية المشتقة من نخاع العظام. تتوسط ناقلات الأحماض الأمينية المعتمدة على Na ⁺ في امتصاص الأحماض الأمينية ذات العلامات الإشعاعية داخل الخلايا ، ويتم تقدير الامتصاص الخلوي عن طريق قياس النشاط الإشعاعي.

البروتوكول

يتطلب استخدام المواد المشعة (RAM) موافقة مسبقة من لجنة السلامة المعينة في كل مؤسسة.

فئة < ص = "jove_title" >1. امتصاص الأحماض الأمينية في الخلايا

1. لوحة 5 × 10⁴ خلايا ST2 في كل بئر من لوحة زراعة الأنسجة المكونة من 12 بئر. خلايا صفيحية في α-MEM تحتوي على 10٪ FBS و 100 وحدة / مل بنسلين و 0.1 ميكروغرام / مل ستربتومايسين (Pen / Strepe). قم بوضع آبار إضافية من الخلايا لتحديد عدد الخلية لكل شرط للتطبيع في الخطوة 1.12. احتضان الخلايا في حاضنة زراعة الخلايا المرطبة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد_{الكربون 2}.
2. استزراع الخلايا لمدة 2-3 أيام حتى التقاء.
3. في يوم التجربة ، قم بإعداد المحاليل التالية: 1x محلول ملحي مخزن بالفوسف....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 0.25٪ تربسين جيبكو 25200 طبق 12 بئر كورنينج 3513 عداد التلألؤ بيكمان LS6500 كلوريد الكالسيوم سيغما سي 1016 كلوريد الكولين سيغما سي 7077 D- (+) - محلول الجلوكوز سيغما جي 8769 DPBS جيبكو 14190 هيبس (1 م) جيبكو 15630 [م] L- [3،4-3H (N)] - الجلوتامين بيركين إلمر NET551250UC قوارير الومضادة السائلة سيغما Z190535 محلول كلوريد الليثيوم ، 8M سيغما L7026 كلوريد المغنيسيوم سيغما M8266 ميمα جيبكو هاتف 12561 أنبوب الطرد المركزي الدقيق ، 15 مل بيوتيكس 89511-256 كلوريد البوتاسيوم سيغما ص 3911 بيكربونات الصوديوم سيغما إس 6014 كلوريد الصوديوم سيغما S9888 كبريتات دوديسيل الصوديوم سيغما 436143 Ultima Gold (محلول التلألؤ) بيركين إلمر 6013329 α-(ميثيل أمينو) حمض الأيزوبوتيريك سيغما M2383