مقايسة المستشعر الحيوي الموصلية القائمة على β-اللاكتاماز لتفاعلات البروتين والبروتين

الملخص

المصدر: Vandevenne، M.، et al. استخدام مقايسة الاستشعار الحيوي الموصلية القائمة على β اللاكتاماز للكشف عن التفاعلات الجزيئية الحيوية. J. Vis. إكسب. (2018)

يوضح هذا الفيديو مقايسة مستشعر حيوي موصلية لدراسة تفاعل الجسم المضاد مع مستضد مستهدف ثابت على شريحة محول الطاقة. تم تصميم المستشعر الحيوي ليحتوي على بروتين خيميري ثنائي الوظيفة - إنزيم β لاكتاماز مع موقع تحفيزي وظيفي مدمج في جسم نانوي للارتباط بالمستضد المستهدف الثابت للحركة. عند الارتباط ، يولد التحلل المائي التحفيزي لركيزة المضادات الحيوية بواسطة إنزيم β-lactamase إشارة كهربائية - مما يؤكد تفاعل المستضد والأجسام المضادة.

البروتوكول

فئة

1. تحضير عينة البروتين

1. إنتاج وتنقية البروتين الهجين BlaP-cAb-Lys3 كما ورد في دراستنا السابقة. قم بتخزين البروتين في 50 ملي مولار من الفوسفات الرقم الهيدروجيني 7.4 بالتركيبة التالية: 8 جم من كلوريد الصوديوم ، 0.2 جم من كلوريد الصوديوم ، 1.44 جم من Na₂HPO₄ و 0.24 جم من KH₂PO₄ مذاب في 800 مل من الماء المقطر قم بإصلاح درجة الحموضة في المحلول إلى 7.4 قبل ضبط الحجم النهائي للمحلول إلى 1 لتر. قم بتعقيم محلول البروتين.
2. تحضير محلول مخزون بياض بيض الدجاجة (HEWL). قم بإذابة 100 مجم (40,000 وحدة / مجم) من HEWL المشتراة تجاريا في 10 مل من محلول ملحي للفوسفات (PBS انظر الخطوة 2.1.1). تعقيم محلول البروتين عن طريق الت....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات الكواشف KH₂PO₄ سيجما ألدريتش V000225 ك₂[هب]₄ سيجما ألدريتش 1551128 كلوريد الصوديوم سيجما ألدريتش إس 7653 تريس - حمض الهيدروكلوريك روش 10812846001 EDTA سيجما ألدريتش E9884 كيه سي إل سيجما ألدريتش ص 9541 نا₂HPO₄ سيجما ألدريتش NIST2186II 2-ميركابتو إيثانول سيجما ألدريتش M6250 ألانين سيجما ألدريتش أ 7627 حمض الهيدروكلوريك₄ فلوكا 34288 حل 1M HClO4 ، الموزع: Sigma-Aldrich الكازين المتحلل سيجما ألدريتش هاتف 22090 بنزيل بنسلين الصوديوم سيجما ألدريتش B0900000 ليزوزيم بياض بيض الدجاجة روش 10837059001 هيبتان سيجما ألدريتش 246654 ميثانول سيجما ألدريتش 322415 محلول هيدروكسيد الأمونيوم سيجما ألدريتش 380539 28٪ NH₃ في H2O ، منقى بالتقطير المزدوج (مركز؟) المواد الاستهلاكية المختبرية 6 آبار لوحة غرينر بيو ون 657165 CELLSTAR 6-Well لوحة معدات مقياس الأس الهيدروجيني WTW 1AA110 مقياس الأس الهيدروجيني في المختبر inoLab pH 7110 نظام الفراغ والترشيح نالجين NALG300-4100 حاملات المرشحات مع جهاز الاستقبال ، الموزع: VWR رقائق مستشعر قياس الجهد صنع بواسطة يونس وزملاؤه (المرجع 16) PGSTAT30 أوتولاب ميتروم أوتولاب توقف ، خليفة Autolab PGSTAT302N مقياس رقمي متعدد ، METRAHit 22M جوسن ميتراوات توقف ، قاعدة ميتراهيت الخلف