Method Article

الفحص المجهري لانعكاس التداخل للتصور الخالي من الملصقات لديناميكيات الأنابيب الدقيقة

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Mahamdeh, M., et al. تنفيذ الفحص المجهري لانعكاس التداخل للتصوير عالي السرعة الخالي من الملصقات للأنابيب الدقيقة. J. Vis. Exp. (2019).

في هذا الفيديو ، نصف تقنية الفحص المجهري لانعكاس التداخل (IRM) لتصور الأنابيب الدقيقة التي تنمو على سطح غطاء في وجود مخزن مؤقت مناسب. عند الإضاءة بالضوء الساقط ، تعكس واجهة الغطاء العازلة وواجهة الأنابيب الدقيقة العازلة الضوء ، والتي تتحد لإنشاء نمط تداخل ، مما يتيح تصور الأنابيب الدقيقة كصور عالية التباين على خلفية ساطعة.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_title" >1. تعديل المجهر والعدسة الموضوعية

  1. أدخل مرآة 50/50 في عجلة المرشح لمجهر الفلورسنت باستخدام مكعب مرشح مناسب (الشكل 1). تعامل مع المرآة 50/50 بحذر حيث غالبا ما يكون لديهم طلاء مضاد للانعكاس.
    ملاحظه: استخدمنا مرآة 50/50 في مكعب مرشح فارغ من المجهر. يتم إدخال المرآة 50/50 حيث توجد المرآة ثنائية اللون.
  2. استخدم هدف زيت تكبير عال / فتحة عددية عالية (NA).
    ملاحظه: في هذا البروتوكول ، استخدمنا هدف 100x / 1.3 NA.
< p class = "jove_title" >2. تحضير الغرفة للصق الأنابيب الدقيقة على السطح
  1. نظف شرائح المجهر وأغطية 22 مم × 22 مم (للمجهر العمودي)....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" >figure-results-1
الشكل 1. التمثيل التخطيطي ل IRM. (أ) تمر إضاءة epi من مصدر الضوء عبر غشاء الفتحة قبل الوصول إلى مرآة 50/50. يحدد الغشاء الفتحة عرض الشعاع وبالتالي الإضاءة NA. تعكس المرآة 50/50 جزئيا الضوء حتى الهدف لإضاءة العينة. يتم جمع الضوء المنعكس من العينة ثم عرضه على شريحة الكاميرا (بواسطة العدسة الأنبوبية) حيث يتداخل لإنشاء الصورة. تباين الصورة هو نتيجة التداخل بين الضوء المنعكس من السطح البيني للزجاج/الماء (I1) والضوء المنعكس من سطح.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments مجهر نيكون تي كسوف مجهر مقلوب يستخدم لأداء التجارب 50/50 شعاع الخائن صفاء 21000 عند الشراء تأكد من اختيار أبعاد الفاصل التي تناسب المكعب المستخدم في المجهر خطة نيكون FLUOR 100X/0.5-1.3 هدف القزحية نيكون MRH02902 هدف التصوير. يحتوي هذا الهدف على قزحية ضبط NA تم فتحها على NA 1.3 منظف عالمي موكاسول سيجما ألدريتش Z637181-2 لتر تستخدم لتنظيف الأغطية والشرائح فيلم البارافين البلاستيكي (الاسم التجاري Parafilm M) سيجما ألدريتش ص 7793 تستخدم لبناء قنوات التدفق الأجسام المضادة ل TAMRA إنفيتروجين أ -6397 تستخدم لربط الجزيئات المسماة ب Tamra (مثل الأنابيب الدقيقة) بسطح العينة. RRID (AB_2536196) Poloxamer 407 (الاسم التجاري Pluronic F-127) سيجما ألدريتش تستخدم لسد سطح القناة لمنع الارتباط غير المحدد 40 نانومتر من الجسيمات النانوية للذهب سيجما ألدريتش 753637 تستخدم كعينة تحكم 20 نانومتر من الجسيمات النانوية للذهب سيجما ألدريتش هاتف: 753610 تستخدم كعينة تحكم كاميرا Zyla 4.2 أندور زيلا 4.2 2048 × 2048 بكسل (حجم 6.5 ميكرومتر بكسل) بكفاءة كمية تبلغ 72٪ ونطاق ديناميكي 16 بت برنامج تتبع Feista https://www.bcube-dresden.de/ المهرجان / ويكي / العيد الأنابيب الدقيقة المستقرة أعد في المنزل (انظر المراجع في النص)

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Interference Reflection MicroscopyMicrotubule DynamicsLabel Free ImagingMicrotubule GrowthMicrotubule ShrinkageAntibody CoatingParaffin ChannelTime Lapse ImagingAperture DiaphragmBRB80 Buffer

Related Articles