طريقة للحث على التهاب سطح العين في نموذج الفئران

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Singh ، J. ، et al. تحريض التهاب سطح العين وجمع الأنسجة المصابة. J. Vis. Exp. (2022)

يوضح هذا الفيديو طريقة للحث على التهاب سطح العين وخلل الغدة الميبومية في نموذج الفئران. يؤدي تحفيز الجهاز المناعي للفأر باستخدام مادة مناعية وإعادة التحفيز لاحقا بنفس الجين المناعي إلى تعزيز التهاب سطح العين ، مما يؤدي إلى انسداد إفراز غدة ميبوميان من خلال aggNETs التي تنتجها العدلات ويؤدي إلى مرض جفاف العين.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحريض التهاب سطح العين في الفئران

1. إجراء تحضير المناعة للتحصين.
   1. تحضير الوجين المناعي طازجا في يوم التحصين ، وخلط البيضا الألبومي (OVA ، 50 مجم / مل) وسم السعال الديكي (100 ميكروغرام / مل) في محلول ملحي وهيدروكسيد الألومنيوم المساعد (40 مجم / مل) (انظر جدول المواد) بنسبة 1: 1.
      أنذر: قم بإجراء فتح وإعادة تشكيل وإعداد مناعي لسم السعال الديكي في خزانة أمان رقائقية. ارتد ملابس واقية وتجنب أي ملامسة للجلد.
   2. احتضان الخليط المناعي والمساعد في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة وقم بتحميل 100 ميكرولتر في حقنة سعة 1 مل.
   3. إجراء الحقن داخل الصفاق للمحلول المناعي في فأر غير مخدر.
      1. أمسك الماوس بهدوء من الذيل أثناء الإمساك بشبكة القفص. امسك بقوة جلد الظهر ومنطقة الرقبة بين الإبهام والسبابة وثبت الذيل والأطراف السفلية بين الخاتم والإصبع الصغير على راحة اليد.
      2. حافظ على الماوس الثابت ورأسه لأسفل.
      3. حقن 100 ميكرولتر من محلول المناعة المحضر في الربع الأيمن أو الأيسر من تجويف البطن السفلي.
2. إجراء تحدي سطح العين بعد أسبوعين من التحصين.
   1. تخدير الفأر بالأيزوفلوران (2.5٪).
   2. ضع 5 ميكرولتر من OVA (50 مجم / مل) أو محلول ملحي (0.9٪ كلوريد الصوديوم) لكل عين على كلتا العينين وانتظر حتى تمتص العين القطرة. يستغرق هذا ~ 5 دقائق.
   3. كرر الإجراء 1 مرة يوميا لمدة 7 أيام.
      ملاحظه: يمكن إجراء الإعطاء الموضعي للأدوية بنفس الطريقة.

< p class = "jove_title" >2. مجموعة إفرازات العين

1. استرجع إفرازات العين التي تشكلت خلال مرحلة التحدي عن طريق وضع 50 ميكرولتر من محلول ملحي معقم على العين مباشرة بعد التحدي.

< p class = "jove_title" >3. استئصال الأنسجة السطحية للعين

1. قم بتشريح الجفون وكرة العين باتباع الخطوات أدناه.
   1. القتل الرحيم للفأر عن طريق اختناق ثاني أكسيد الكربون₂ وخلع عنق الرحم.
   2. ضع الماوس على سطح مستو.
   3. تطهير المنطقة المدارية حول العين بمسحة مشربة بنسبة 70٪ من الإيثانول.
   4. قم بعمل شق بين الأذن والجيب الرجعي الحجاجي وعلى طول السطح فوق العظم الحرشفي عموديا ، مع تمديد الشق أفقيا أسفل الجفن السفلي على طول عظم الفك العلوي وفوق الجفن العلوي على طول العظم الأمامي. هذا يشكل شقا حول العين (الشكل 1).
   5. أمسك الأنسجة المقطعة حول العين بحذر باستخدام ملقط منحني واسحب الأنسجة ومقلة العين للخارج.
   6. ضع الأعضاء المستأصلة في PBS معقمة.
   7. تقليم أنسجة عضلات الوجه الزائدة حول الجفون العلوية المقطوعة باستخدام مشرط وتحت المجهر المجسم.
2. اجمع الملتحمة باتباع الخطوات أدناه.
   1. ضع الجفن العلوي على طبق بتري جاف تحت المجهر المجسم.
   2. باستخدام ملاقط دقيقة ومشرط ، قشر الطبقة البيضاء المخاطية برفق شديد من السطح الداخلي للجفن.
3. بعد ذلك ، قم بتشريح القرنية باتباع الخطوات أدناه.
   1. ضع كرة العين على طبق بتري جاف جديد فوق الثلج الجاف لمدة 3 دقائق.
   2. خذ طبق بتري على سطح المقعد في وضع ثابت.
   3. قم بعمل شق صغير على حدود القرنية بجوار الأطراف باستخدام مقص حاد ناعم.
   4. إطالة الشق باستخدام المشرط حول كرة العين ، وفصل الصلبة عن القرنية.
   5. قم بإزالة بقايا القزحية والعدسة من مؤخرة القرنية عن طريق التنظيف بسخاء بمحلول ملحي.

النتائج

p class = "jove_content" >
الشكل 1: استئصال أنسجة الوجه المحيطة بالمنطقة المدارية.يشار إلى مسار الشق باللون الأحمر. يسمح ذلك باستئصال أعضاء العين والتحقيق في تأثير وتأثيرات العلاجات المختلفة التي يتم إعطاؤها موضعيا على أعضاء العين الملحقة مثل الملتحمة والقرنية.

المواد