الكشف عن تنشيط الالتهابات عن طريق المجهر الفلوري

الملخص

المصدر: den Hartigh، A. B. et al.، الكشف عن تنشيط الالتهاب وموت الخلايا المتفتحة في الضامة المشتقة من نخاع عظم الفئران. J. Vis. Exp.(2018)

يوضح هذا الفيديو طريقة للكشف عن تنشيط التهاب NLRP3 في الضامة باستخدام مجسات مراسل الفلورسنت. تتم معالجة الخلايا بأيونوفورات البوتاسيوم والجلايسين للحث على تجميع الالتهابات وتنشيط الكاسباز -1. تصور مجسات مراسل الفلورسنت الكاسباز 1 المنشط ، ويتم تلطيخ الخلايا بصبغة فلورية لتصور النوى.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< ص class = "jove_title" >1. حصاد نخاع العظام

1. قم بإزالة عظم الفخذ والساق بشكل معقم من الفأر وتنظيف العظام باستخدام أدوات معقمة. ضع العظام النظيفة في Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) + 5 مللي N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid (HEPES) + 0.2 ملغ/مل L-glutamine + 0.05 مللي 2-ميركابتو إيثانول + 50 ملغ/مل كبريتات جنتاميسين + 10,000 واحد/مل بنسلين/ستربتومايسين + 10٪ مصل بقري جنيني (FBS، DMEM-10 كامل) واحتضان الأنبوب على الثلج لمدة 15 دقيقة.
2. قم بإزالة المفاصل الكروية القريبة والبعيدة باست....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات إي إم ATCC 30-2003 لزراعة خلايا L929 استنساخ NCRC 929 (L929) ATCC CCL-1 طقم التثبيت / النفاذية BD Biosciences 554714 يتضمن محلول التثبيت والنفاذية ، ومحلول الغسيل. تركيبات خاصة. يحتوي على 4.2٪ فورمالديهايد جلايسين بيوراد 161-0718 فام - YVAD - FMK تقنيات الكيمياء المناعية 98 Dulbecco's PBS ، خال من الكالسيوم ، بدون مغنيسيوم إنفيتروجين 14190144 مصل الأبقار الجنينية، مؤهل، أمريكي المنشأ إنفيتروجين 26140079 يتم تعطيل الحرارة عند 55 درجة مئوية لمدة 50 دقيقة الجنتاميسين إنفيتروجين 15750060 إطالة الذهب تصاعد المتوسطة إنفيتروجين ص 36934 تركيبة خاصة. علاج وسط تصاعد. تصلب إلى مؤشر حراري عند 1.46 HEPES (نقي للغاية) إنفيتروجين 11344041 ل-جلوتامين إنفيتروجين 21051024 البنسلين - ستربتومايسين إنفيتروجين 15140122 الماوس C57BL / 6J مختبر جاكسون 664 ب Caspase-1/11-/- ماوس مختبر جاكسون 16621 مجهر متحد البؤر Leica SP8X لايكا LPS فائق النقاء من السالمونيلا المينيسوتا R595 (إعادة) قائمة البيولوجية 434 بيتا ميركابتو إيثانول ميليبور سيجما M6250-10 مل DMSO ميليبور سيجما D2650-5X10ML EDTA ميليبور سيجما E5391