تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. مصدر الماوس والإسكان
- اشتقاق فئران البروتين الفلوري الأخضر المحسن Lysozyme M (LysM-eGFP) على خلفية وراثية C57BL / 6J كما هو موضح سابقا. اشتقاق LysM-EGFP× الاستجابة الأولية للتمايز النخاعي 88 (MyD88) -/- الفئران عن طريق عبور فئران LysM-EGFP مع MyD88 - / - الفئران على خلفية C57BL / 6J.
- الفئران المنزلية في فيفاريوم. بالنسبة لهذه الدراسات ، تم إيواء في جامعة كاليفورنيا ، ديفيس في مجموعات قبل الجراحة وتم إيواؤها منفردة بعد الجراحة. استخدم الفئران التي تتراوح أعمارها بين 10-16 أسبوعا.
< ص الفئة = "jove_title">
2. جرح الجلد الاستئصالي
- يجب تطبيق 100 ميكرولتر من 0.03 ملغم/مل بوبرينورفين هيدروكلوريد (~0.2 ملغم/كغ) لكل فأر عن طريق الحقن داخل الصفاق.
- بعد عشرين دقيقة من الحقن ، ضع 2-4 فئران في حجرة بها 2-3 لترات في الدقيقة (LPM) أكسجين مع 2-4٪ إيزوفلوران. بمجرد تخدير الفئران بالكامل ، انقل الفئران واحدة تلو الأخرى إلى مخروط أنف متصل ب 2-3 LPM أكسجين مع 2-4٪ إيزوفلوران. تحقق من تخدير الفئران بالكامل عن طريق الضغط بإحكام على كل مخلب خلفي بين الإبهام والسبابة. انتقل إلى الخطوة التالية إذا لم يستجب للقرصة.
- احلق قسما مقاس 1 بوصة × 2 بوصة على الجزء الخلفي من الماوس باستخدام مقص كهربائي وقم بتنظيف منطقة قصاصات الفراء باستخدام منديل نظيف أو شاش. تجنب استخدام غسول إزالة الشعر لأنه قد يسبب التهابا زائدا.
- نظف الجزء الخلفي من الماوس أولا بشاش مبلل باليود بنسبة 10٪ ثم بشاش مبلل بالإيثانول بنسبة 70٪. نظف المنطقة بنمط حلزوني ، وتحرك للخارج من مركز منطقة الجراحة. انتظر حوالي 1 دقيقة حتى تجف منطقة الجراحة قبل الجراحة.
- أمسك الجزء الخلفي المحلوق من الفأر بشكل غير محكم بين إصبعين واضغط بقوة على خزعة مثقبة معقمة مقاس 6 مم في وسط المنطقة الجراحية المعدة. لا تسحب الجلد مشدودا.
- قم بلف الخزعة المثقوبة لإنشاء مخطط دائري على الجلد يقطع الجلد بالكامل في قسم واحد على الأقل من المخطط التفصيلي. احرص على عدم قطع اللفافة أو الأنسجة الأساسية.
- استخدم مقصا وملقطا معقما لقطع البشرة والأدمة باتباع النمط الدائري المطبوع بالخزعة المثقوبة.
