$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >
1. عدوى Mtb للخلايا المشتقة من الخلايا الوحيدة
ملاحظة: يجب تنفيذ الخطوات التالية في منشأة BSL-3.
- قم بإعادة تعليق حبيبات المتفطرة السلية (Mtb) في وسط RPMI خال من المصل في أنبوب معقم جديد سعة 50 مل وضبط التركيز البكتيري النهائي إلى حوالي 5 × 106 CFU / مل.
- قم بإزالة وسط زراعة الخلية من لوحة (صفائح) 6 آبار تحتوي على خلايا مشتقة من الخلايا الوحيدة. أضف 1 مل من وسط RPMI الخالي من المصل إلى كل بئر. أضف 1 مل من المعلق البكتيري لكل بئر للحصول على تعدد العدوى (MOI) 5: 1 ، أي 5 × 106 CFU لكل 106 ضامة في 2 مل / بئر واحتضان الألواح لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيدالكربون 2.
- بعد الإصابة ، اغسل الخلايا 3 مرات ب 1 مل من محلول الغسيل المعقم لإزالة البكتيريا خارج الخلية. قم بإمالة اللوحة وإزالة مخزن الغسيل بالكامل بعناية من الزوايا. أعد تعليق الخلايا المشتقة من الخلايا الوحيدة المصابة ب Mtb في 2 مل من وسط RPMI الكامل بدون مضادات حيوية واستمر في تلطيخ قياس التدفق الخلوي أو احتضان الخلايا لمدة 24 ساعة أخرى (أو نقاط زمنية أخرى) قبل قياس التدفق الخلوي.