$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على جمع العينات وفقا لإرشادات IRB الخاصة بالمعهد.
فئة
1. تحليل المقاومة المعتمدة على Vn للنشاط المبيد للجراثيم في المصل البشري
- شراء مصل بشري عادي (NHS) من مصدر تجاري. تحضير فيترونكتين أو مصل Vn المستنفد (VDS). قم بتجديد VDS ب 180 نانومتر Vn وهو ما يعادل Vn الموجود في NHS.
- تحضير المصل المعطل بالحرارة (HIS) عن طريق تسخين NHS عند 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة من أجل تعطيل البروتينات التكميلية.
ملاحظه: تم تحديد التركيز الأمثل للمصل (5٪) ووقت الحضانة (15 دقيقة) للمقايسة تجريبيا للمستدمية النزلية من النوع f (Hif). يمكن أن تختلف هذه المعلمات باختلاف مسببات الأمراض البكتيرية الأخرى.
- بكتيريا الثقافة (في هذه الحالة ، Hif M10 و Hif M10Δlph المتحول) إلى مرحلة منتصف السجل (OD600 = 0.3). بكتيريا الحبيبات عن طريق الطرد المركزي عند 3,500 × جم لمدة 10 دقائق.
- أعد تعليق الحبيبات البكتيرية بحجم 1 من سكر العنب الجيلاتين المخزن المؤقت فيرونال (DGVB ++ ؛ درجة الحموضة 7.3) التي تحتوي على 2.5٪ (وزن / حجم) جلوكوز ، 2 ملي كلوريد المغنيسيوم ، MgCl2 ، 0.15 ملي كلوريد الكالسيوم ، كلوريدالكالسيوم 2 ، و 0.1٪ (الوزن / حجم) الجيلاتين.
- أضف 1.5 × 103 وحدة تشكيل مستعمرة (CFU) من البكتيريا إلى 100 ميكرولتر من DGVB ++ يحتوي على مصل 5٪ (NHS أو HIS أو VDS أو VDS + 180 نانومتر Vn). احتضان العينة عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة مع الرج عند 300 دورة في الدقيقة.
- قم بإزالة 10 ميكرولتر من خليط التفاعل عند 0 دقيقة (عينة T0) و 15 دقيقة (عينة Tt) وطبق على أجار الشوكولاتة. احتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية طوال الليل.
- بعد الحضانة ، عد المستعمرات التي تظهر على اللوحة. احسب النسبة المئوية للبكتيريا المقتولة باستخدام المعادلة التالية: (وحدة تشكيل المستعمرة أو CFU عند Tt) / (CFU عند T0) × 100.