تقنية لإنشاء نموذج عدوى بكتيرية في يرقات الحشرات

الملخص

المصدر: Asai، M.، et al. استخدام اللافقاريات غاليريا ميلونيلا كنموذج عدوى لدراسة مركب المتفطرة السلية. J. Vis. Exp. (2019).

يوضح هذا الفيديو طريقة لإنشاء نموذج عدوى المتفطرة في يرقات عثة الشمع الأكبر ، Galleria mellonella. يتم حقن سلالة مضيئة بيولوجية من المتفطرة بوفيس BCG في هيموليمف اليرقة لإثبات العدوى ، ويتم قياس التلألؤ البيولوجي على فترات محددة مسبقا لدراسة تقدم العدوى.

البروتوكول

ملاحظة: يجب تنفيذ جميع الأعمال الموضحة أدناه في مختبر CL2 داخل خزانة السلامة الميكروبيولوجية من الفئة 2 (MSC) وفقا لإرشادات الصحة والسلامة المحلية.

< p class = "jove_title" >1. تحضير M. bovis BCG lux للعدوى

1. قم بإذابة مخزون الجلسرين المجمد سعة 1.2 مل (15٪) من M. bovis BCG lux ، سلالة لقاح مونتريال التي تحولت مع البلازميد المكوكي pSMT1 الذي يحمل جينات luxAB من Vibrio harveyi التي تشفر إنزيم لوسيفيراز.
2. تلقيح 15 مل من مرق ميدلبروك 7H9 الذي يحتوي على 0.2٪ جلسرين ، و 10٪ ألبومين ، وسكر العنب ، وتخصيب الكاتلاز (ADC) ، و 50 ميكروغرام / مل hygromycin مع 1.2 مل....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أنبوب تفاعل 1.5 مل (إيبندورف) إيبندورف 22431021 ماصة 20 و200 و1000 ميكرولتر وأطراف مفلترة أي مورد غير متاح 24 بئر لوحة ثقافة غرينر 662160 [م] 25 مل ماصات وماصة صبي أي مورد غير متاح 3 مقصورات طبق بتري (94/15 مم) غرينر 637102 الطرد المركزي أي مورد غير متاح خزانة أمان من الفئة الثانية أي مورد غير متاح قارورة إرلينماير بغطاء مهواة (250 مل) كورنينج CLS40183 الإيثانول (>99.7٪) VWR 208221.321 غاليريا ميلونيلا (250 لكل عبوة) ليففود دايركت المملكة المتحدة دبليو 250 الجلسرين سيجما ألدريتش جي 5150 هيغروميسين ب كورنينج 30-240 كرون حقنة صغيرة (25 ميكرولتر ، 25 جا) إس جي إي 3000 ريال أجهزة الطرد المركزي الدقيقة أي مورد غير متاح ميدلبروك 7H11 أجار BD Bioscience هاتف: 283810 مرق ميدلبروك 7H9 BD Bioscience هاتف: 271310 إثراء ميدلبروك ADC BD Bioscience 212352 إثراء ميدلبروك OADC BD Bioscience هاتف: 212240 المتفطرة بوفيس بي سي جي لوكس مختلف غير متاح ن-ديسيل ألدهيد سيجما ألدريتش D7384-100G حاضنة الاهتزاز المداري أي مورد غير متاح محلول ملحي مخزن بالفوسفات سيجما ألدريتش P4417-100TAB بولي سوربات 80 (توين -80) سيجما ألدريتش P8074-500 مل صندوق صغير أي مورد غير متاح يوصى باستخدام صندوق مسطح بفتحات تهوية داكنة أو غير محكمة الغلق ملاقط أي مورد غير متاح ملاقط طويلة قصيرة وضيقة / حادة طبق بتري (94/15 مم) غرينر 633181 ورق الترشيح (94 مم) أي مورد غير متاح قص ليناسب