نموذج فأر كيس هوائي لجمع الإفرازات الالتهابية الناجمة عن عديدات السكاريد الدهنية

الملخص

المصدر: Lu, Q., et al. الكشف عن هجرة وتسلل العدلات في الفئران. J. Vis. Exp.(2020).

يصف هذا الفيديو إجراء توليد كيس هوائي في الأنسجة تحت الجلد للفئران وجمع الإفرازات الالتهابية استجابة لإعطاء عديدات السكاريد الدهنية في الجسم الحي. يغطي هذا الفيديو أيضا تحليل تسلل العدلات في كيس الهواء.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة

1. فحص الحقيبة الهوائية

1. حقن الهواء الأول
   1. في اليوم 0 ، قم بتخدير الفئران بالكامل بنسبة 5٪ من الأيزوفلوران لمدة 3 دقائق في غرفة التخدير بالغاز بسرعة 2 لتر / دقيقة ، والحفاظ على تخدير كل فأر في وحدة تنفس واحدة بنسبة 2٪ إيزوفلوران بسرعة 0.5 لتر / دقيقة
      ملاحظه: يتم ضمان عمق كاف للتخدير عن طريق الضغط على أصابع القدم قبل نقل الفئران من الغرفة إلى وحدة التنفس الفردية. يجب ألا تتحرك الأرجل عند ضغط أصابع القدم.
   2. استخدم مرشحا 0.22 ميكرومتر متصلا بحقنة سعة 5 مل للحصول على حجم 3 مل من الهواء المعقم.
   3. ارفع الجلد الخلفي للفأر المخدر بالملاقط وحقن 3 مل من الهواء المعقم تحت الجلد باستخدام إبرة 26 جم × 3/8 بوصة.
   4. بعد العلاج ، قم بإزالة الفئران من وحدة التنفس. راقب الفئران للتأكد من أنها على قيد الحياة حتى تبدأ في الحركة.
2. حقن الهواء الثاني
   1. في اليوم 3 ، قم بحقن 3 مل إضافية من الهواء المعقم في الجيب الهوائي الذي تم إنشاؤه مسبقا للحفاظ على كيس الهواء كما هو موضح في القسم 1.1.
3. العلاج
   1. في اليوم 6 ، قبل 6 ساعات من التضحية ، قم بحقن علاجات مختلفة في كيس الهواء. حقن 1 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) كعنصر تحكم سلبي. حقن 1 مل من 1 ميكروغرام / مل LPS كعنصر تحكم إيجابي لإحداث التهاب موضعي.
   2. تخدير الفئران بالكامل بنسبة 5٪ أيزوفلوران لمدة 3 دقائق في غرفة التخدير بالغاز بسرعة 2 لتر / دقيقة ، والحفاظ على تخدير كل فأر في وحدة تنفس واحدة مع 2٪ إيزوفلوران بسرعة 0.5 لتر / دقيقة. تحضير مخزن الغسيل وفقا لجدول المواد.
      ملاحظه: يتم ضمان عمق كاف للتخدير عن طريق الضغط على أصابع القدم قبل نقل الفئران من الغرفة إلى وحدة التنفس الفردية. يجب ألا تتحرك الأرجل عند ضغط أصابع القدم.
   3. لكل كيس هوائي ، اغسل كيس الهواء ب 1 مل من محلول الغسيل واجمع الإفرازات الالتهابية في أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل. اغسل كيس الهواء ب 2 مل من محلول الغسيل 2x واجمع الإفرازات الالتهابية في نفس أنبوب الطرد المركزي.
   4. جهاز طرد مركزي بوزن 100 × جم لمدة 10 دقائق في RT. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الخلايا في 1 مل من محلول الغسيل. عد الخلايا لتحديد نسبة العدلات باستخدام محلل أمراض الدم التلقائي.
      ملاحظه: انظر النتائج التمثيلية في الشكل 1.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: النتائج التمثيلية لمقايسة الحقيبة الهوائية. (أ) رسم توضيحي لمقايسة الحقيبة الهوائية. (ب) النتائج التمثيلية لتسلل مجموعة الكريات البيض الفرعية في مقايسة كيس الهواء. برنامج تلفزيوني: التحكم. LPS: 1 ميكروغرام / مل LPS. وتعرض البيانات كمتوسط ± SD.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 100٪ إيثانول بكين للأعمال الكيميائية 100٪ ميثانول بكين للأعمال الكيميائية 15 مل أنبوب الطرد المركزي البولي بروبلين المخروطي صقر صقر 23 جم × 1 1/4 بوصة إبرة دينار بحريني 305120 26 جم × 3/8 بوصة إبرة دينار بحريني 305110 30 جم × 1/2 بوصة إبرة دينار بحريني 305106 حقنة 5 مل دينار بحريني Z683574 50 مل أنبوب الطرد المركزي البولي بروبلين المخروطي صقر 14-432-22 نظام التخدير بالغاز ZS ديشوانغ ZS-MV-IV محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، 1× امزج 90٪ ddH₂O مع 10٪ (حجم حجمي / حجم) 10× PBS ، معقم محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، 10× قم بإذابة 16 جم كلوريد الصوديوم ، 0.4 جم كلوريد كلوريد ، 2.88 جم Na2HPO4 · 2H2O ، 0.48 جم KH2PO4 (اللامائية) في 200 مل ddH2O ، اضبط درجة الحموضة 7.4 ، معقمة عديد السكاريد الدهني (LPS) سيغما L3012 غسل المخزن المؤقت في فحص الحقيبة الهوائية تمييع 0.5 م EDTA إلى 10 مم باستخدام HBSS