تقنية لتوليد نموذج فأر التهاب المفاصل الناجم عن مادة مساعدة

الملخص

المصدر: Lu ، Q. ، et al. الكشف عن هجرة وتسلل العدلات في الفئران.

يوضح هذا الفيديو طريقة لتوليد التهاب المفاصل الناجم عن المساعدة في نموذج الفئران. يتم حقن مساعد فرويند الكامل (CFA) في مفصل الكاحل والمناطق حول المفصل. ينشط CFA جهاز المناعة ، مما يؤدي إلى تسلل العدلات والالتهاب المبالغ فيه.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحريض نموذج الفأر الناجم عن التهاب المفاصل المساعد (AA)

1. قم بتعليق مساعد فرويند الكامل (CFA) عن طريق دوامة 5 ثوان على الأقل ، ثم اسحب 100 ميكرولتر من التعليق في حاقن الأنسولين.
   ملاحظه: نوصي باستخدام CFA جديد تماما في التجارب لضمان العقم.
2. تخدير الفئران كما هو موصوف.
3. ضع علامة على المخلب المختار وحقن 20 ميكرولتر من CFA في مساحة مفصل الكاحل. حقن 20 ميكرولتر من التعليق في أربع بقع حول المفصل على المخلب المختار (80 ميكرولتر في المجموع).
4. قم بإزالة الفئران من وحدة التنفس وضع الفئران المعالجة في غرفة جديدة. راقب الفئران للتأكد من أنها تتنفس حتى تستعيد القدرة على الحركة.
5. كل 3 أيام ، قم بتقييم قطر المفصل عن طريق قياس قطر مفصل الكاحل باستخدام مقياس سمك الجيب (الشكل 1 أ).
6. كل 3 أيام ، قم بتقييم شدة التهاب المفاصل من خلال معيار تسجيل التهاب المفاصل (الشكل 1C): 0 ، طبيعي ، لا يوجد دليل على الحمامي والتورم ؛ 1 ، أخف التهاب المفاصل والحمامي والتورم الخفيف المحصور في الرصغ أو مفصل الكاحل ؛ 2 ، التهاب المفاصل المعتدل والحمامي وتورم خفيف يمتد من الكاحل إلى الرصغ ؛ 3 ، التهاب المفاصل الحاد والحمامي والتورم المعتدل الممتد من الكاحل إلى مفاصل مشط القدم ؛ 4 ، تشمل أشد التهاب المفاصل والحمامي والتورم الشديد الكاحل والقدم والأصابع أو التهاب الطرف.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: النتائج التمثيلية لنموذج الفأر المسبب لالتهاب المفاصل العامل المساعد (AA). (أ) تم قياس قطر مفصل الكاحل باستخدام مقياس سمك الجيب. (ب) تم تقييم تورم المفاصل بناء على قطر مفصل الكاحل (ن = 7). (ج) صور لكل درجة التهاب المفاصل. (د) تم تصنيف شدة التهاب المفاصل على مقياس من 0-4 نقاط (ن = 7). وتعرض البيانات كمتوسط ± SD.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 15 مل أنبوب الطرد المركزي البولي بروبلين المخروطي صقر 14-959-53 أ 23 جم × 1 1/4 بوصة إبرة دينار بحريني 305120 26 جم × 3/8 بوصة إبرة دينار بحريني 305110 30 جم × 1/2 بوصة إبرة دينار بحريني 305106 مساعد فرويند الكامل، 10 ملجم/مل سيغما 1002036152 أنابيب Eppendorf الدقيقة ، 1.5 مل سيغما Z606340 مقياس سمك الاتصال الهاتفي ميتوتويو 7301 ريال Shu Rui U40 إبرة حقن الأنسولين المعقمة التي يمكن التخلص منها 1 مل دينار بحريني 328421