مقالة منهجية

القسطرة عبر الإحليل والتلقيح البكتيري لتوليد نموذج عدوى المسالك البولية في ذكور الفئران

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Zychlinsky Scharff ، A. ، وآخرون. عدوى المسالك البولية في نموذج حيواني صغير: قسطرة عبر الإحليل للفئران من الذكور والإناث J. Vis. Exp. (2017).

يوضح هذا الفيديو تأسيس عدوى الإشريكية القولونية المسببة للبول في مثانة الفئران الأنثوية من خلال تقطير القسطرة عبر الإحليل. نجحت البكتيريا المحقونة في إنشاء عدوى في المسالك البولية داخل المثانة ، مما يوفر منصة قيمة لدراسة الأمراض المرتبطة بالرعاية الصحية المتعلقة بالمسالك البولية.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحضير القسطرة

  1. قم بإعداد قنية واحدة للأطفال للوصول إلى الوريد لكل مجموعة من الفئران المصابة. باستخدام آلية الزنبرك المدمجة ، قم بتجريد كل قنية من إبرتها ، وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تخلص من الإبر ، مع الحفاظ على القنية البلاستيكية الوريدية فقط.
  2. عقيم القسطرة في غطاء التدفق الرقائقي لدورة واحدة من الأشعة فوق البنفسجية (UV) ، عادة 25 - 30 دقيقة
    ملاحظة: يمكن استخدام القسطرة لأكثر من فأر واحد ، ومع ذلك ، يجب استخدام قسطرة جديدة بين المجموعات التجريبية أو الجنسين أو السلالات البكتيرية.
< p class = "jove_title" >2. تحضير الإشريكية القولونية المسببة للبول للعدوى

  1. قبل يومين على الأقل من الإصابة ، باستخدام حلقة تلقيح معقمة ، قم بربط UPEC من مخزون بكتيري مجمد على صفيحة أجار Luria Broth (LB) ، التي تحتوي على مضادات حيوية إذا كان ذلك مناسبا. احتضن عند 37 درجة مئوية طوال الليل. يمكن تخزين الأطباق عند 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى أسبوع واحد.
  2. في قارورة Erlenmeyer معقمة سعة 100 مل ، قم بتلقيح 10 مل من LB ، التي تحتوي على مضادات حيوية إذا كان ذلك مناسبا ، بمستعمرة واحدة من صفيحة LB واحتضانها عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها (حوالي 16 - 18 ساعة).
    ملاحظة: تسمح الثقافات الدائمة بالتعبير عن النوع 1 pili ، وهو أمر ضروري للعدوى. سيكون للثقافات التي نمت بالاهتزاز تعبير بيلي أقل كفاءة ، وبالتالي معدلات غير متسقة للإصابة.
  3. قم بقياس الكثافة الضوئية (OD) 600 للثقافة الليلية واحسب عدد البكتيريا لكل مل باستخدام منحنى نمو محدد مسبقا. على سبيل المثال ، بالنسبة لسلالة UPEC UTI89 ، OD600 = 0.35 يعادل 2 × 108 CFU لكل مل ، وبالتالي ، فإن الثقافة الليلية مع OD600 = 2.4 ستكون معادلة ل 13.7 × 108 CFU لكل مل. حدد تجريبيا العلاقة بين OD600 والبكتيريا القابلة للحياة مع كل سلالة جديدة تستخدم للعدوى.
  4. تحديد كمية البكتيريا المطلوبة من خلال النظر في عدد المصابة وأن كل فأر يجب أن يتلقى ما يقرب من 107 وحدات تشكيل مستعمرة (CFU) في 50 ميكرولتر PBS. قم بتضمين الحجم الميت ~ 130 ميكرولتر للقسطرة والحقنة و 100 ميكرولتر اللازمة لتحديد اللقاح.
    1. قم بتدوير المعلق البكتيري في جهاز طرد مركزي دقيق منضدي عند 17,000 × جم لمدة 1 دقيقة وأعد تعليق الحبيبات البكتيرية الناتجة عند 2 × 108 CFU لكل مل في PBS. قم بتخفيف كمية من هذا المعلق بشكل متسلسل وقم بتثبيتها على أجار LB ، مع المضادات الحيوية إذا كان ذلك مناسبا ، لتحديد اللقاح الدقيق لكل عدوى.
  5. اسحب اللقاح البكتيري في حقنة سعة 1 مل وقم بتوصيل القسطرة بنهاية المحقنة. اضغط على المحقنة لإزالة أي هواء واضغط على المكبس لملء مساحة الهواء الميت في القسطرة قبل البدء في التقطير.
< ص الفئة = "jove_title" >3. تحضير الفئران

  1. تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق بمقدار 100 مجم / كجم من الكيتامين و 5 مجم / كجم زيلازين. يمكن توفير حرارة إضافية.
  2. تأكد من تخدير كل ماوس بالكامل عن طريق الضغط على وسادة القدم بضغط متوسط. يتم تخدير الفئران بالكامل عندما لا تتفاعل وتتطلب 3-5 دقائق للوصول إلى هذه الحالة.
  3. ضع الفئران ضعيفة واضغط على أسفل البطن لتفريغ المثانة من البول. تبدو المثانة الممتلئة وكأنها حبة بازلاء تحت الجلد بين القمم الحرقفية.
    ملاحظة: تم استخدام الأيزوفلوران المستنشق لقسطرة إناث الفئران ، ومع ذلك ، لم يتم اختبار ما إذا كانت ذكور الفئران قد تم تخديرها بشكل كاف عن طريق الأيزوفلوران المستنشق لهذا الإجراء.
< p class = "jove_title" >4. التقطير عبر الإحليل للفئران الذكور

  1. ضع ملقطين للإبهام في الجمجمة والذيلية على الأعضاء التناسلية الخارجية للفأر. اسحب القلفة لكشف حشفة القضيب بالكامل. بمجرد وضع القضيب خارجيا ، حرر ملقط الإبهام.
  2. أعد وضع الملقط لتثبيت القضيب البارز بشكل عمودي على الحيوان ، مع إمساك العضو برفق ولكن مشدود. تصور الصماخ المجرى المعليل وأدخل القسطرة بعناية في الفتحة الصغيرة عند طرف العضو. قم بتوجيه القسطرة برفق إلى القضيب ، باتجاه جسم الفأر ، مع الحفاظ على توتر لطيف مع الملقط. لا تتطلب القسطرة أي تزييت. لا تدفع القسطرة إلى القضيب. يجب أن تنزلق القسطرة بسلاسة إلى مجرى البول ، مما يشير إلى الوضع الصحيح.
  3. بمجرد أن يلتقي محور القسطرة بطرف القضيب ، قم بتوزيع 50 ميكرولتر من اللقاح ببطء شديد ، مع الحفاظ على موضع القضيب. يمكن ملاحظة جودة التقطير في هذا الوقت وفقا لدرجة جودة التقطير المحددة مسبقا ، مثل تلك الموضحة في الشكل 1.
  4. اسحب القسطرة ببطء، أكثر من 5، لمنع تسرب اللقاح. ضع الفئران في أقفاصها في وضع ضعيف. يجب أن تبدأ في التعافي بعد 30 - 45 دقيقة من إعطاء التخدير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: لا ترتبط جودة التقطير بالعبء البكتيري في 24 ساعة بعد الإصابة. تم غرس الفئران من الإناث والذكور C57Bl / 6 من الإناث والذكور من ستة إلى 8 أسابيع مع 107 CFU من UPEC. مباشرة بعد كل غرس ، قام باحث واحد بتعيين درجة جودة للتقطير ، كما هو محدد بمعايير محددة (نص مربع). بعد 24 ساعة من الإصابة ، تمت إزالة المثانات بشكل معقم لتعداد العبء البكتيري. تصور المؤامرة درج...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات قسطرة BD Insyte Autoguard Shielded IV 24 جم ، قطر خارجي 0.7 مم ، طول 14 ملم BD الطبية 381811 أو 381411* * رقم الكتالوج يعتمد على البلد حلقة التلقيح غرينر بيو ون 731171 محاقن بي براون 9166017 فولت ملقط الإبهام (Adson) أدوات العلوم الدقيقة 11006-12 حقنة الأنسولين تيرومو BS05M2913 أنابيب 5 مل ، بولي بروبيلين صقر 352063 مرق LB ميلر ديفكو هاتف: 244620 أجار LB ميلر ديفكو هاتف: 244520 كوفيت بيو راد هاتف: 223-9955

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة