$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. العدوى
- إصابة البعوض Anopheles stephensi ب Plasmodium berghei ANKA عن طريق إطعامها لمدة 15 دقيقة على فأر المشيجية. حافظ على البعوض المصاب عند رطوبة 80٪ و 21 درجة مئوية.
- اجمع إناث البعوض من قفصها بعد 17 إلى 22 يوما من وجبة الدم. ضعها على الثلج لتخديرها.
- باستخدام الملقط ، ضع ثلاثة إلى أربعة بعوض على شريحة زجاجية مغطاة بقطرة من وسط RPMI البارد. ضع الشريحة تحت المجهر.
- باستخدام الملقط ، قم بتمديد البعوض بعناية بين الرأس والجسم. عزل الغدة اللعابية باستخدام حقنة وإبرة. كرر هذا الإجراء مع البعوض المتبقي.
- اجمع الغدد اللعابية من الشريحة الزجاجية عن طريق امتصاصها بماصة زجاجية وتجميعها في أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل.
ملاحظه: اعتمادا على معدلات الإصابة ، عادة ما يمكن الحصول على 8,000 إلى 15,000 من البوغات المعدية لكل غدة لعابية.
- لمدة 3 دقائق تقريبا ، قم بتحطيم الغدد اللعابية المعزولة داخل أنبوب الطرد المركزي بعصا بلاستيكية صغيرة لعزل الأبواغ من أنسجة الغدد اللعابية.
- جهاز طرد مركزي لمدة 3 دقائق عند 1,000 × جم و 4 درجات مئوية لتنقية الأبواغ من الأنسجة المتبقية.
- الماصة المادة الطافية ، التي تحتوي على البوغات (SPZ) ، إلى أنبوب طرد مركزي جديد وحساب البوغات المنقاة في مقياس كثافة الدم Neubauer.
- اضبط تركيز البوغات المنقاة إلى 10,000 / مل عن طريق إضافة محلول ملحي مخزن بالفوسفات.
- حقن ما مجموعه 1,000 sporozoite (0.1 مل) في الأوردة الخلفية للفئران الفطرية C57BL / 6 لبدء العدوى. لتسهيل الحقن ، ضع الفئران C57BL / 6 في مصفاة وضع ذيولها في ماء دافئ (حوالي 37 درجة مئوية) للمساعدة في تصور عروق الذيل.
ملاحظه: الحقن نفسه هو إجراء قصير يمكن إجراؤه في غضون ثوان قليلة.
- مرة واحدة يوميا ، تحقق من طفيليات الدم في مرحلة الدم على مسحات الدم من اليوم 3 فصاعدا بعد عدوى SPZ.
- قم بتقييم الفئران مرة واحدة يوميا باستخدام درجة مقياس غيبوبة وسلوك الفئران السريع (RMCBS) ، بدءا من اليوم 5 بعد حقن البوغ
.
- تقييم الفئران بالتصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) وفقا لدرجة مقياس غيبوبة وسلوك الفئران السريع (RMCBS) وسؤال البحث الذي سيتم معالجته.