$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. تخدير وتنبيبها وتلقيحها
< p class = "jove_content" >
ملاحظة: يوصى باستخدام ذكور Sprague-Dawley المؤهلة للمناعة الخالية من مسببات الأمراض (SPF) التي تزن 100-120 جم. قم بتزويد جميع بالطعام والماء
بشكل آزاد وقم بإيواؤها اجتماعيا على رقائق الخشب أو غيرها من الفراش الماص مع دورات قياسية مدتها 12 ساعة من الضوء والظلام.
- قبل إجراء أي تجارب ، احصل على قنية معدنية وأنابيب بولي إيثيلين بالحجم المناسب للأنواع الحيوانية وتعقيمها. احصل على محاقن معقمة سعة 1 مل يمكن التخلص منها وإبر معقمة قياس 25 يمكن التخلص منها.
أنذر: تخلص دائما من هذه المحاقن والإبر في حاوية أدوات حادة.
- بالنسبة للفئران ، قم بشراء أو تصنيع قنية معدنية يبلغ طولها حوالي 12 سم ، ولها معرف 0.9 - 1.0 مم و OD من 1.0 - 1.2 مم ويتم ثنيها بزاوية تقريبية تبلغ 45 درجة في أحد طرفيها. قم بقص أنبوب البولي إيثيلين بطول 11 إلى 12 بوصة بمعرف 0.4 مم و OD 0.8 مم (راجع الشكل 1 أ.)
- ضع القنية المعدنية في أنبوب زجاجي وغطاء لولبي وأوتوكلاف بالطرق القياسية للتعقيم. انقع وقم بتخزين الأطوال المقطوعة لأنبوب البولي إيثيلين في دورق مغطى يحتوي على الكحول.
- تحضير سطح العمل وجهاز التنبيب.
- ضع حصيرة نظيفة يمكن التخلص منها على سطح العمل بالقرب من الحمام المائي. انقل القنية المعدنية ، في أنبوب التخزين الزجاجي الخاص بها ، إلى هذا السطح. قم بإزالة الغطاء من أنبوب التخزين وحرك طرف "المقبض" للقنية إلى الطرف المفتوح للأنبوب.
- باستخدام ملقط معقم ، قم بإزالة طول واحد من أنابيب البولي إيثيلين من الدورق وأدخلها من داخل القنية المعدنية المعقمة ، مع التأكد من أنها تتحرك بحرية. ضع إبرة معقمة قياس 25 (للفئران) على الطرف الحر لأنبوب البولي إيثيلين عن طريق تحريك الإبرة عدة مم في الأنبوب. (راجع الشكل 1 أ للفئران).
- ضع علامات التوجيه على كل من القنية المعدنية وأنبوب البولي إيثيلين للإشارة إلى عمق الإدخال في باتباع إجراء التنبيب الموضح أدناه على واحد تم القتل الرحيم. افتح تجويف الصدر للمراقبة ، ثم ضع القنية المعدنية بشكل صحيح وقم بتطوير أنبوب البولي إيثيلين بشكل مناسب. باستخدام قلم لا يمحى ، ضع علامة على القنية المعدنية حيث تلتقي بفم وأنبوب البولي إيثيلين حيث تلتقي بالجزء العلوي من القنية المعدنية للمساعدة في وضعها بشكل صحيح في المتبقية.
- داخل غطاء الدخان (أو باستخدام نظام الكسح المناسب) ، قم بتخدير ما يصل إلى 6 في المرة الواحدة في غرفة مغلقة مزودة ب ≤5٪ من الأيزوفلوران في 1.5 لتر / دقيقة من الأكسجين حتى يتم تثبيط منعكس الكمامة (حوالي 1 دقيقة).
ملاحظه: قبل إجراء أي تجارب ، حدد الجرعة الآمنة ووقت التعرض للإيزوفلوران في ظل الظروف المحددة المستخدمة (مثل حجم / نوع الغرفة وحجم / نوع / سلالة) لمنع التعرض القاتل غير المقصود.
- املأ حقنة معقمة سعة 1 مل (للفئران) بمحلول ملحي معقم عن طريق وضع الطرف المعقم في المحلول الملحي وسحبه مرة أخرى على المكبس. قم بتوصيل المحقنة بالإبرة المثبتة على أنبوب البولي إيثيلين وقم بغسل الحجم الكامل للمحلول الملحي عبر الأنبوب حتى يتم إفراغ المحقنة.
- املأ المحقنة باللقاح القائم على أجار من الحاوية الموجودة في الحمام المائي ، وقم بغسل أجار عبر الأنبوب حتى يتم تحضير الأنبوب (على سبيل المثال ، مملوءة بالكامل بالأجار).
- بالنسبة للفئران ، قم بإزالة الإبرة قياس 25 (المثبتة على أنبوب البولي إيثيلين) من المحقنة التي تستخدم لمرة واحدة. تخلص من المحقنة المستخدمة في حاوية الأدوات الحادة. املأ حقنة جديدة معقمة يمكن التخلص منها سعة 1 مل باللقاح القائم على أجار من الحاوية الموجودة في الحمام المائي عن طريق وضع الطرف المعقم في اللقاح وسحب المكبس. أعد توصيل الإبرة (المثبتة على أنبوب البولي إيثيلين) وقم بتمرير أجار عبر الأنبوب عن طريق الضغط على المكبس حتى يمتلئ الأنبوب بالكامل بالأجار.
- أخرج واحدا من غرفة التخدير. ضع في وضع ضعيف على السجادة التي تستخدم لمرة واحدة مع الرأس إلى اليمين والذيل إلى اليسار كما هو موضح في الشكل 1 ج.
- باستخدام جهاز التنبيب (أي القنية المعدنية المزودة بأنابيب البولي إيثيلين) ، قم بتنبيب وإدخال القنية في الفص الكبير للرئة اليسرى (انظر الشكل 1 د).
- أدخل الطرف الحر للقنية المعدنية في فم. اقلب القنية بحيث تكون النهاية الحرة مائلة لأعلى وتقدمها برفق إلى القصبة الهوائية ، متجاوزة بعناية الهياكل الحنجرية بحركة التواء طفيفة. تأكد من الإدخال في القصبة الهوائية بدلا من المريء عن طريق تحريك القنية برفق للأمام والخلف عدة مرات أثناء ملامسة حلقات القصبة الهوائية بالسبابة اليسرى كما هو موضح في الشكل 1C.
- عندما تصل القنية إلى التشعب حيث تنقسم القصبة الهوائية إلى القصبات الهوائية اليمنى واليسرى ، قم بحركة التواء طفيفة باتجاه الجانب الأيسر للحيوان لضمان إدخال القنية في القصبة الهوائية اليسرى. تقدم القنية المعدنية حتى تصل النهاية إلى منتصف الطريق إلى ثلاثة أرباع أسفل الرئة اليسرى ، باستخدام علامة التوجيه الموضوعة مسبقا للتأكد من الوصول إلى العمق المناسب.
- مع وضع القنية المعدنية في مكانها ، قم بتقديم أنبوب البولي إيثيلين عدة مم. استخدم علامة التوجيه الموضوعة مسبقا على الأنبوب للتأكد من أنه متقدم بما يكفي فقط للخروج من نهاية القنية المعدنية وعدم ثقب الرئة.
- مع وضع كلتا القنيات في مكانها ، استخدم المحقنة المرفقة لغرس 100 ميكرولتر (للفئران) من معلق أجار في عمق الفص الكبير للرئة اليسرى (انظر الشكل 1 د). اسحب عدة مم من أنبوب البولي إيثيلين ، ثم قم بإزالة جهاز التنبيب السليم برفق. ضعه مرة أخرى في أنبوب التخزين الزجاجي وانقل إلى قفص جديد للتعافي.
