تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. قنية القناة الليمفاوية المساريقية
- ضع بحيث يكون جانبه الأيمن متجها نحو المشغل. إجراء الجراحة بمساعدة المجهر الجراحي أو بدونها حسب الحاجة.
- افتح الطبقة العليا من جدار عضلة البطن بشق مستقيم بطول 4 سم يمتد من خط الوسط (عملية الخنجري) إلى الجانب الأيمن حوالي 2 سم تحت القفص الصدري (الهامش الساحلي) باستخدام شفرة مشرط معقمة (انظر الشكل 1 ب).
- افتح الطبقات المتبقية من جدار عضلة البطن من 4 - 5 مم جانبيا إلى خط الوسط إلى الجناح الأيمن باستخدام زوج صغير من المقص الجراحي (انظر الشكل 1 ب).
- اسحب الأمعاء الدقيقة تحت جدار عضلة البطن الأيسر واحتفظ بها في مكانها باستخدام 2-3 قطع من الشاش المعقم المشبع بالمحلول الملحي العادي.
- قم بجسر الجرذ فوق حقنة بلاستيكية سعة 10 مل موضوعة أفقيا تحت ظهر الجرذ على مستوى الكلية اليمنى لتسهيل تصور القناة الليمفاوية المساريقية.
- حدد موقع القناة الليمفاوية المساريقية العلوية: وعاء يبلغ قطره حوالي 0.5 - 1 مم عموديا على الكلية اليمنى ومنقاريا على الفور وموازيا للشريان المساريقي (وعاء دموي أحمر غامق نابض ؛ انظر الشكل 1C).
ملاحظة: في الفئران غير الصائمة أو التي تحتوي على جرعات مسبقة بالزيت ، يكون الوعاء أبيض وغير شفاف وأسهل في التصور منه في الفئران الصائمة التي تكون شفافة تماما.
- افحص المنطقة الذيلية على الفور إلى القناة الليمفاوية المساريقية العلوية الكبيرة والشريان المساريقي لتحديد ما إذا كانت القناة الليمفاوية الإضافية الثانية الأصغر موجودة. إذا كان موجودا ، فقم بمنع تدفق الليمفاوية عبر القناة عن طريق قطع القناة وسدها بالغراء الفائق ، أو ربط خياطة حول القناة ، لضمان جمع الحجم الكامل للليمفاوية المتدفقة من الأمعاء من القناة الليمفاوية المساريقية العلوية.
- مرر زوجا من الملقط المستقيم عبر فراش الدهون حول الكلى في الهامش السفلي للكلية اليمنى ، وعبر طبقات النسيج الضام أسفل الوريد الأجوف مباشرة ، في اتجاه مواز للقناة الليمفاوية المساريقية العلوية.
- باستخدام طرف الملقط ، أمسك القنية الليمفاوية واسحبها عبر سرير الدهون حول الكلى مع أحد طرفيه المجاور مباشرة للقناة الليمفاوية المساريقية والآخر خارج على مستوى الكلية اليمنى.
- عزل القناة الليمفاوية المساريقية عن الطبقات المغطاة من الأنسجة الضامة والدهنية عن طريق التشريح الحاد. احرص على عدم ثقب القناة الليمفاوية أو إتلافها.
- بعد عزل القناة الليمفاوية ، قم بعمل ثقب صغير في القناة الليمفاوية إما بمقص دقيق أو الطرف الحاد لملقط الصائغ أو إبرة 25 جرام. احرص على عدم قطع الوعاء تماما.
- تأكد من أن القنية الليمفاوية مملوءة بالكامل بمحلول مضاد للتخثر (باستخدام حقنة وإبرة 25 جرام) بدون فجوات هوائية. أدخل القنية الليمفاوية حوالي 2-4 مم داخل القناة الليمفاوية المساريقية عبر الفتحة الصغيرة بمساعدة زوج صغير من الملقط.
- راقب القنية الليمفاوية لبضع دقائق. لاحظ التدفق التدريجي للليمفاوية المعوية من نهاية التجميع الحر للقنية إذا نجحت القنية. إذا لم تنجح القنية ، كرر الخطوات 1.8 - 1.12.
- إذا نجحت القنية ، فقم بتأمين القنية عن طريق وضع قطرة صغيرة من المادة اللاصقة البيطرية فوق فتحة المدخل في القناة الليمفاوية. احرص على عدم انسداد الوعاء عن طريق تطبيق مادة لاصقة بيطرية زائدة.
- أثناء انتظار تثبيت المادة اللاصقة البيطرية ، راقب تدفق الليمفاوية لعدة دقائق للتأكد من نجاح إجراء القنية. بمجرد التأكد من نجاح القنية ، قم بإزالة قطع الشاش التي تم وضعها في تجويف البطن بعناية وضع الأمعاء الدقيقة في موضعها الأصلي.
قم - بوزن أنابيب التجميع الليمفاوية مسبقا ، وأنابيب الملصقات لجمع عينات الليمفاوية والدم وإضافة محلول مضاد للتخثر. أضف محلول كاف مضاد للتخثر لتحقيق تركيز نهائي يبلغ 1 مجم / مل EDTA في ماء معقم أو 10-20 وحدة دولية / مل من الهيبارين في الليمفاوية أو الدم المجمع.
- ضع أنبوب تجميع ليمفاوي يحتوي على مضاد للتخثر (الخطوة 1.16) في نهاية القنية لتجميع الليمفاوية التي تتدفق بحرية.
- بعد ذلك ، قم بتقشير الاثني عشر لتسريب محاليل و / أو تركيبات الإماهة.
