تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. الاستعدادات في اليوم السابق للإجراء الجراحي
- قم بصيام الجرذ في الليلة السابقة للجراحة إذا لزم الأمر. تأكد من أن الفئران لديها حرية الوصول إلى الماء.
- تحضير المحاليل التي سيتم إعطاؤها للفئران.
- تحضير محلول الجفاف مثل محلول ملحي معقم أو محلول رينجر.
- تحضير محاليل التخدير حسب الحاجة. يتكون المخدر المستخدم في التجارب الموصوفة هنا من "كوكتيل 1" محضر عن طريق الجمع بين 1.9 مل من الكيتامين 100 مجم / مل ، و 0.5 مل من الزيلازين 100 مجم / مل ، و 0.2 مل من الأسيبرومازين 10 مجم / مل ، و 2.5 مل من المحلول الملحي و "كوكتيل 2" يتكون من 1 مل من الكيتامين 100 مجم / مل و 0.1 مل من الأسيبرومازين 10 مجم / مل. ملاحظة: قد يفضل استنشاق الأيزوفلوران أو السيفوفلوران لأنه يمكن أن يوفر مستوى تخدير جراحي لفترة أطول من الوقت.
- تحضير محلول مضاد للتخثر يحتوي على 10 ملغم/مل من حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA) في ماء معقم أو 10 وحدة دولية/مل من الهيبارين في محلول ملحي لشطف القنية الليمفاوية. أيضا ، قم بإعداد محلول مضاد للتخثر يحتوي على 2.5 - 10 وحدة دولية / مل من الهيبارين في محلول ملحي لطرد قنية الشريان السباتي.
- تحضير قنية البولي إيثيلين لإدخالها في الاثني عشر (0.96 مم OD ، 0.58 مم معرف)
- اقطع القنية إلى الطول المطلوب (عادة 25-30 سم لقنية الاثني عشر) وضع شطبة عند طرف القنية باستخدام شفرة جراحية معقمة (انظر الشكل 1). < / >
ملاحظه: هذا يزيد من سهولة إدخال القنية ويقلل من حدوث انسداد القنية بعد الإدخال.
- ضع نقطة ربط على شكل حرف J في قنية داخل الاثني عشر عن طريق لف جزء صغير من القنية مرة أخرى على نفسها ، وتسخينها بأخف وزنا أو صفيحة ساخنة ، ثم قصها حسب الحجم (انظر الشكل 1).
- قم بتوصيل القنية الليمفاوية بإبرة وحقنة 25 جم تحتوي على محلول مضاد للتخثر (محضر في الخطوة 1.3). املأ القنية الليمفاوية بالمحلول المضاد للتخثر واترك المحلول في القنية طوال الليل (O / N) لتقليل حدوث تكوين جلطة في القنية الليمفاوية أثناء تجميع الليمفاوية.
- تحضير الأنابيب لجمع عينات الليمفاوية والدم. قم بوزن أنابيب التجميع الليمفاوية مسبقا ، وأنابيب الملصقات لجمع عينات الليمفاوية والدم وإضافة محلول مضاد للتخثر. أضف محلول كاف مضاد للتخثر لتحقيق تركيز نهائي يبلغ 1 مجم / مل من حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA) في الماء المعقم أو 10-20 وحدة دولية / مل من الهيبارين في الليمفاوية أو الدم المجمع.
< p class = "jove_title" >
2. الاستعدادات مباشرة قبل بدء العملية الجراحية
- افحص القنيات عن طريق غسلها بمحلول ملحي معقم أو محلول مضاد للتخثر للتأكد من أنها حاصلة على براءة اختراع.
- جهز الجرذ للإجراء الجراحي.
- تخدير الجرذ طوال فترة الجراحة وجمع العينات.
- على سبيل المثال ، ابدأ التخدير عن طريق الحقن تحت الجلد بمقدار 1.5 مل / كجم من الكوكتيل I (من الخطوة 1.2.2) في ثنية الجلد في الجزء الخلفي من عنق الجرذ باستخدام حقنة 1 مل متصلة بإبرة 25 جراما. حافظ على التخدير عن طريق الحقن داخل الصفاق بمقدار 0.44 مل / كجم من الكوكتيل 2 (من الخطوة 1.2.2) كل ساعة تقريبا حسب الحاجة ، باستخدام حقنة 1 مل متصلة بإبرة 25 جم.
- قبل البدء في الجراحة ، تأكد من أن عمق التخدير كاف من خلال مراقبة معدل التنفس وحركة الشعيرات وتوتر العضلات والاستجابات للمنبهات مثل قرص القدم. قم بإجراء تخدير إضافي حسب الحاجة.
- حلق الفراء من المناطق الجراحية ، والتي تشمل الجانب الأيمن من البطن ، لقنية الاثني عشر.
- نظف المناطق الجراحية بشكل معقم باستخدام محلول بوفيدون اليود أو محلول الكلورهيكسيدين ومقشر الإيثانول بنسبة 70٪. كرر هذا 3 مرات لكل منطقة ، مع الانتهاء من التنظيف النهائي بنسبة 70٪ من الإيثانول.
- ضع في الاستلقاء الظهري على ملاءة نظيفة فوق وسادة جراحية ساخنة (37 درجة مئوية).
< p class = "jove_title" >
3. قنية الاثني عشر
- ضع بحيث يكون جانبه الأيمن متجها نحو المشغل. إجراء الجراحة بمساعدة المجهر الجراحي أو بدونها حسب الحاجة.
- افتح الطبقة العليا من جدار عضلة البطن بشق مستقيم بطول 4 سم يمتد من خط الوسط (عملية الخنجري) إلى الجانب الأيمن حوالي 2 سم تحت القفص الصدري (الهامش الساحلي) باستخدام شفرة مشرط معقمة (انظر الشكل 2 ب).
- افتح الطبقات المتبقية من جدار عضلة البطن من 4 - 5 مم جانبيا إلى خط الوسط إلى الجانب الأيمن باستخدام زوج صغير من المقص الجراحي (انظر الشكل 2 ب).
- اسحب الأمعاء الدقيقة تحت جدار عضلة البطن الأيسر واحتفظ بها في مكانها باستخدام 2-3 قطع من الشاش المعقم المشبع بالمحلول الملحي العادي.
- قم بتوصيل قنية الاثني عشر بحقنة (على سبيل المثال ، 10 مل) مملوءة بمحلول الجفاف.
- حدد الاثني عشر على أنه الجزء الوردي الفاتح (مع المزيد من الأوعية الدموية) من الأمعاء الدقيقة ، والذي يكشف عن المعدة عند السحب اللطيف لأسفل.
- قم بعمل ثقب صغير في الاثني عشر حوالي 2 سم تحت تقاطع المعدة والاثني عشر (البواب) باستخدام إبرة معقمة 23 جم.
- أدخل الطرف المعقوف على شكل حرف J من قنية الاثني عشر من خلال فتحة الثقب. ثبت في مكانه بقطرة من غراء cyanoacrylate.
- ابدأ ترطيب الجرذ عن طريق ربط القنية بحقنة الإماهة المحملة في مضخة التسريب. وفقا للأدبيات ، تتراوح معدلات الجفاف من 0.5 - 3 مل / ساعة.
- بعد الانتهاء من قنية الليمفاوية والاثني عشر ، أغلق الشق في جدار عضلة البطن بالغرز. ثم أغلق شق الجلد عن طريق وضع بضع قطرات من لاصق الأنسجة (سيانواكريلات) على طول جانب الشق وقرص الجلد على جانبي الشق معا.
