إنشاء نموذج فأر لسرطان الرئة الجنبي المنتشر

الملخص

المصدر: Yasui, H., et al. العلاج المناعي الضوئي بالأشعة تحت الحمراء القريبة لنماذج الفئران للانتشار الجنبي. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح هذا الفيديو طريقة لإنشاء نموذج فأر للانتشار الجنبي عن طريق حقن تعليق خلايا سرطان الرئة في التجويف الصدري للفأر الذي يعاني من نقص المناعة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. إنشاء نموذج الانتشار الجنبي

1. قم بإعداد الخلايا المستهدفة التي تعبر عن اللوسيفيراز وتعليق 1.0 × 10⁶ خلايا مستهدفة في 100 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)
   ملاحظه: الخلايا السرطانية داخل الصدر مثل سرطان الرئة و MPM مناسبة كخلايا مستهدفة. تم تحضير الخلايا التي تعبر عن لوسيفيراز عن طريق تعداء جين لوسيفيراز ، وتم تأكيد التعبير العالي عن لوسيفيراز بعد > 10 ممرات خلايا. تمت زراعة الخلايا في وسط مكمل بنسبة 10٪ من البنسلين الأبقار في مصل الجنين (100 وحدة دولية / مل) والستربتومايسين (100 مجم / مل). تم تعديل عدد الخلايا وفقا لمعدل نمو الورم والمسار الزمني للعلاج (1.0. × 10 5-6.0 × 10⁶ خلايا / وزن الجسم).
2. تحضير أنثى الفئران العارية الرياضية المتماثلة الزيجوت التي تتراوح أعمارها بين 8 و 12 أسبوعا ، بوزن جسم مفضل من 19-21 جم.
3. تخدير الفئران أثناء العملية باستخدام الأيزوفلوران (مقدمة: 4-5٪ ، صيانة 2-3٪) ؛ اضغط على الذيل بالملاقط للتأكد من عدم وجود تفاعل.
4. اصنع سدادة برغوة البوليسترين وقم بتوصيل السدادة بإبرة 30 جم بحيث يظل الطرف عند 5 مم لمنع إصابة الرئة. ثني طرف الإبرة بملقط نظيف أو بالضغط عليه على جسم صلب تم تنظيفه باستخدام 70٪ EtOH لتجنب استرواح الصدر (الشكل 1).
   أنذر: احرص على عدم اختراق نفسه. استخدم الملقط لثني الإبرة. لا تمسك السدادة عند توصيلها بالإبرة. من الآمن لصق السدادة قبل ملء الخلايا في المحقنة.
5. املأ حقنة (1 مل) بالخلايا المستهدفة وقم بإرفاق إبرة 30G بسدادة.
6. تطهير صدر بنسبة 70٪ EtOH قبل العملية.
7. اثقب إبرة في صدر الفأر من خلال الفضاء الوربي. بسبب المقاومة أثناء الضرب بالأضلاع في ذلك الوقت ، تحرك طرف الإبرة لأعلى ولأسفل. بعد المرور عبر الفضاء الوربي ، اضغط على المحقنة على الماوس وحقن 100 ميكرولتر من الخلايا المستهدفة (الشكل 2).
   ملاحظه: يتنفس الفأر بعمق عندما تدخل الإبرة بشكل صحيح إلى تجويف الصدر. مع ثني طرف الإبرة ، يمكن تجنب استرواح الصدر والحقن غير المناسب للخلايا في الرئة.
   ملاحظه: يوصى بثقب جدار الصدر الأيمن لتجنب خطر الإصابة بثقب جدار القلب.
8. لف الماوس 2-3 مرات لنشر الخلايا في جميع أنحاء التجويف الصدري.
9. أعد الماوس إلى قفص نظيف ودافئ وراقبه حتى يصبح متنقلا. بعد العملية ، سوف يستيقظ الفأر من التخدير ويتصرف بشكل طبيعي.

النتائج

الشكل 1: جهاز سهل الصنع يدويا لزرع الخلايا. قم بتوصيل السدادة المصنوعة من رغوة البوليسترين بإبرة 30G بحيث يظل الطرف عند 5 مم. يجب ثني طرف الإبرة لتجنب استرواح الصدر.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 2: حقن الخلايا المستهدفة في التجويف الصدري. أدر الماوس جانبا وثقب ال...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات حقنة 1 مل تيرومو إس إس -01 تي لتجربة الفئران إبرة 30 جرام نيبرو 1907613 لتجربة الفئران BALB / cSlc-نو / نو اليابان SLC د-لوسيفيرين (ملح البوتاسيوم) كايمان للكيماويات 14681 للتصوير الحيوي و DLIT إيزوفلوران واكو 095-06573 لتخدير الفئران 0.25 واط / حجم ٪ تريبسين -1 مليمول / لتر محلول EDTA 4Na مع الفينول الأحمر واكو هاتف: 209-016941 لزراعة الخلايا RPMI-1640 مع L-glutamine و Phenol Red واكو 189-02025 لزراعة الخلايا