تلطيخ الفلورسين في نموذج فئران العين الجافة المناعية الذاتية لفحص تلف القرنية

الملخص

المصدر: Hou Ahiua, et al. نموذج فأر العين الجافة المناعي الذاتي المزمن مع زيادة في الخلايا التائية للذاكرة المستجيبة في أنسجة مقلة العين. J.Vis. إكسب. (2017)

يوضح هذا الفيديو تلطيخ القرنية التالفة باستخدام صبغة الفلورسين لتقييم مدى مرض جفاف العين المناعي الذاتي في نموذج الفئران. تشير بقع التألق الخضراء لألياف الكولاجين الملطخة إلى الخلايا الظهارية التالفة في القرنية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تقييم ملامح جفاف العين

قياس تلف القرنية بتلطيخ الفلورسين.

1. أضف 2 ميكرولتر من 0.2٪ فلورسين إلى قرنية الفئران. افتح وأغلق جفون الفئران بشكل سلبي 3 مرات بإصبع مرتديا قفازا لنشر صبغة الفلورسين على سطح العين.
2. بعد 1 دقيقة ، ارسم 1 مل من المحلول الملحي بحقنة 3 مل (بدون أي إبرة مرفقة) ، ضع المحقنة على بعد حوالي 2-3 مم أمام القرنية ، وادفع المحلول الملحي برفق على العين.
3. احصل على صور تحت المرشح الأزرق الكوبالت (أي ~ 400 نانومتر) لمجهر تصوير العين مع إطفاء أضواء الخلفية.
   ملاحظه: تم تحليل الصور لاحقا بواسطة نظام تصنيف معدل من المنشورات السابقة. ثم تم تحليل الصور عن طريق التصنيف الذاتي لعدد البقع الخضراء ومساحتها وشثافتها من 0 إلى 2 ، حيث يشير 0 إلى عدم وجودها ، ويشير 1 إلى تلطيخ نقطي أقل من 50 بقعة ، ويشير 2 إلى تلطيخ نقطي لأكثر من 50 بقعة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات الكاشف محلول الصوديوم الفلوريسين Bausch & Lomb المملكة المتحدة المحدودة غير أ معدات مجهر ستيريو مع إضاءة ضوئية حلقية وكاميرا كارل زايس غير أ