$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
فئة
1. التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي أو نموذج EAE
- تحريض نموذج EAE
- استخدم فئران أنثى 129S4 / SvJae ×C57BL / 6 تتراوح أعمارها بين 10 و 13 أسبوعا لتحريض EAE.
- أعط الفئران حقنة تحت الجلد ، في الجزء العلوي والسفلي من الظهر ، من الببتيد MOG35 - 55 (البروتين السكري قليل التغصن المايلين) (200 ميكروغرام) ، مستحلب في 200 ميكرولتر من مساعد فرويند الكامل (CFA) الذي يحتوي على 400 ميكروغرام من المتفطرة السلية.
ملاحظه: كتحكم زائف سلبي غير مسبب للأمراض ، يمكن استخدام مساعد فرويند غير المكتمل الذي يحتوي على المتفطرة السلية ، بنفس الحجم وبنفس الطريق.
- بعد ذلك ، ومرة أخرى بعد 24 ساعة ، أعط الفئران حقنة داخل الصفاق من سم السعال الديكي (في المجموع 0.2 ميكروغرام ، مخفف في 200 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات ، PBS). استخدم الفئران غير المعالجة كمجموعة تحكم ، لتتمكن من مقارنة المريضة بالحيوانات السليمة. < / >
ملاحظه: من الممكن أيضا تحفيز EAE مع 200 - 300 ميكروغرام MOG35 - 55 الببتيد ، 300 - 500 ميكروغرام من المتفطرة السلية في CFA ، و 0.2 - 0.3 ميكروغرام من السم السعال الديكي بحجم 0.1 - 0.2 مل لكل حقنة.
- ابتداء من أسبوع واحد بعد الحقن ، افحص الفئران يوميا بحثا عن الأعراض السريرية (انظر الخطوة 1.2.1)
ملاحظه: يختلف يوم ظهور المرض في التجارب المختلفة ، ولكن في ظل الظروف الموجودة في مختبرنا ، يكون هذا حوالي اليوم 11 ، وبالتالي ، يتم تعريف اليوم 14 هنا على أنه 3 أيام بعد ظهور المرض. ظهرت على جميع الفئران في هذه الدراسة أعراض سريرية.
< p class = "jove_title" >
2. تسجيل الفئران
- تصنيف الأعراض السريرية حسب الدرجات السريرية على النحو التالي: 0) لا توجد علامات ، 0.5) شلل بعيد في الذيل ، 1) شلل كامل في الذيل ، 1.5) عرج الذيل وضعف خفيف في الساقين الخلفيتين ، 2) عرج الذيل وضعف شديد في الساقين الخلفيتين ، 2.5) عرج الذيل وشلل الساق الخلفية ، 3) الذيل العرج وشلل الساقين الخلفيتين ، 3.5) شلل كلا الطرفين الخلفيين وضعف أحد الأطراف الأمامية (تم القتل الرحيم للفئران التي حققت هذه النتيجة ، بما يتماشى مع المبادئ التوجيهية الأخلاقية المحلية).