تحريض التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في نموذج الفأر

الملخص

المصدر: Barthelmes، J. et al.، تحريض التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في الفئران وتقييم التوزيع المعتمد على المرض للخلايا المناعية في الأنسجة المختلفة.J. Vis. Exp.(2016)

يوضح الفيديو تحريض التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في نموذج فأر عن طريق حقن مزيج من البروتينات السكرية قليلة التغصن قليلة التغصن والمتفطرة السلية المعطلة. يمكن النموذج الباحثين من دراسة آليات المرض واختبار التدخلات العلاجية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة

1. التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي أو نموذج EAE

1. تحريض نموذج EAE
   1. استخدم فئران أنثى 129S4 / SvJae ×C57BL / 6 تتراوح أعمارها بين 10 و 13 أسبوعا لتحريض EAE.
   2. أعط الفئران حقنة تحت الجلد ، في الجزء العلوي والسفلي من الظهر ، من الببتيد MOG_{35 - 55} (البروتين السكري قليل التغصن المايلين) (200 ميكروغرام) ، مستحلب في 200 ميكرولتر من مساعد فرويند الكامل (CFA) الذي يحتوي على 400 ميكروغرام من المتفطرة السلية.
      ملاحظه: كتحكم زائف سلبي غير مسبب للأمراض ، يمكن استخدام مساعد فرويند غير المكتمل الذي يحتوي على المتفطرة السلية ، بنفس الحجم وبنفس الطريق.
   3. بعد ذلك ، ومرة أخرى بعد 24 ساعة ، أعط الفئران حقنة داخل الصفاق من سم السعال الديكي (في المجموع 0.2 ميكروغرام ، مخفف في 200 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات ، PBS). استخدم الفئران غير المعالجة كمجموعة تحكم ، لتتمكن من مقارنة المريضة بالحيوانات السليمة. < / > ملاحظه: من الممكن أيضا تحفيز EAE مع 200 - 300 ميكروغرام MOG_{35 - 55} الببتيد ، 300 - 500 ميكروغرام من المتفطرة السلية في CFA ، و 0.2 - 0.3 ميكروغرام من السم السعال الديكي بحجم 0.1 - 0.2 مل لكل حقنة.
   4. ابتداء من أسبوع واحد بعد الحقن ، افحص الفئران يوميا بحثا عن الأعراض السريرية (انظر الخطوة 1.2.1)
      ملاحظه: يختلف يوم ظهور المرض في التجارب المختلفة ، ولكن في ظل الظروف الموجودة في مختبرنا ، يكون هذا حوالي اليوم 11 ، وبالتالي ، يتم تعريف اليوم 14 هنا على أنه 3 أيام بعد ظهور المرض. ظهرت على جميع الفئران في هذه الدراسة أعراض سريرية.

< p class = "jove_title" >2. تسجيل الفئران

1. تصنيف الأعراض السريرية حسب الدرجات السريرية على النحو التالي: 0) لا توجد علامات ، 0.5) شلل بعيد في الذيل ، 1) شلل كامل في الذيل ، 1.5) عرج الذيل وضعف خفيف في الساقين الخلفيتين ، 2) عرج الذيل وضعف شديد في الساقين الخلفيتين ، 2.5) عرج الذيل وشلل الساق الخلفية ، 3) الذيل العرج وشلل الساقين الخلفيتين ، 3.5) شلل كلا الطرفين الخلفيين وضعف أحد الأطراف الأمامية (تم القتل الرحيم للفئران التي حققت هذه النتيجة ، بما يتماشى مع المبادئ التوجيهية الأخلاقية المحلية).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مجموعة EAE مختبرات هوك ، لورانس ، الولايات المتحدة الأمريكية إيك 2110