تقييم نشاط قتل الخلايا الفقية ضد مسببات الأمراض البكتيرية

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Paschall ، A. V. et al. ، فحص القتل opsonophelcytic لتقييم الاستجابات المناعية ضد مسببات الأمراض البكتيرية.J. Vis. Exp.(2019)

يظهر الفيديو مقايسة قتل البلعمة البصرية في المختبر باستخدام ثقافة مشتركة للعدلات البشرية مع المكورات العقدية الرئوية. تسهل الأجسام المضادة والبروتينات التكميلية تسيير البكتيريا ، مما يمكن العدلات من التعرف على البكتيريا وقتلها ، مما يدل على نشاط ناجح للعدلات البلعمة.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. ثقافة خلايا HL-60 وتمايزها والتحقق من صحتها

1. تحضير وسائط زراعة الخلايا HL-60 المكونة من 500 مل من معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) مع L-glutamine و 50 مل من مصل الأبقار الجنينية المعطل بالحرارة. لا تضيف المضادات الحيوية لأن ذلك قد يؤثر على تمايز خلايا HL-60.
2. لتكاثر / صيانة خلايا HL-60 ، استزراع 5 × 10⁶ خلايا في 10 مل من وسائط زراعة الخلايا HL-60 في 75 سم² قوارير ذات فتحات تهوية عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون (CO₂). مرور الخلايا كل 3-4 أيام للحفاظ على تركيزات الخلايا المثلى.
   ملاحظه: يجب ألا يتجاوز تركيز الخلية 5 × 10⁶ / مل.
3. قم بتوليد مخ....

النتائج

الشكل 1: التحقق من صحة تمايز خلايا HL-60 عن طريق قياس التدفق الخلوي.تم حصاد خلايا HL-60 المتمايزة وغسلها وإعادة تعليقها في 1 × 10⁵ خلايا / مل PBS. ثم تم تقسيم الخلايا إلى 12 بئرا (100 ميكرولتر / بئر) في صفيحة من 96 بئرا. ثم تم تلطيخ الخلايا بمضاد CD35 المترافق بالفلورسنت ، ومضاد CD71 ، والملحق V ، ويوديد البروبيديوم. تم استخدام الخلايا غير الملوثة أو الخلايا الملطخة بأجسام مضادة من النمط ا.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات المرفق الخامس (APC مقارن) بيو ليجند 640919 مضاد ل CD35 ، بشري (PE مترافق) بيو ليجند 333405 مضاد ل CD71 ، بشري (PE مترافق) بيو ليجند 334105 السلالة البكتيرية المراد استخدامها (مثل المكورات العقدية الرئوية ، WU2) المختبر المرجعي للجهاز التنفسي البكتيري (د. مون نهم) لوحات أجار الدم هاردي ديزاينگىس أ 10 مصل استنساخ الجنين HyClone SH30080.03 الجلسرين سيغما G9012-1L خلايا HL-60 ATCC CCL-240 التحكم في النمط المتنظير IgG (PE مترافق) بيو ليجند 400907 N ، N-dimethylformamide (DMF) فيشر للكيماويات م 2265 يوديد البروبيديوم سيغما ص 4864 وسائط RPMI مع L-glutamine كورنينج 10-040-السيرة الذاتية