إجراء قص ذيل الفأر لجمع الدم المحيطي وعزل البلازما

الملخص

المصدر: Coats، J. S. et al.، التعبير عن السيتوكين الخارجي في الطعوم الغريبة المشتقة من المريض عن طريق الحقن باستخدام خط الخلايا اللحمية المنقولة بالسيتوكين. J. Vis. إكسب. (2017)

في هذا الفيديو ، نوضح إجراء قص الذيل في نموذج الفأر لجمع الدم المحيطي. يخضع الدم الذي تم جمعه لاحقا للطرد المركزي لفصل البلازما ، والتي يمكن استخدامها لمزيد من التجارب.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة

1. جمع الدم التسلسلي ومراقبة البلازما للسيتوكين البشري الخارجي في الفئران

1. جمع الدم عن طريق قص الذيل
   1. قم بتطهير غطاء السلامة الحيوية وقم بتجميع مقبض الماوس والمقص والأدوات / المستلزمات الأخرى لهذا الإجراء.
   2. ضع الماوس في مصفاة وقم بتأمين الأنبوب لتقليل حركة الماوس.
   3. تطهير الذيل والمقص الجراحي بكحول الأيزوبروبيل. ضع كريم مخدر موضعي على الذيل.
   4. باستخدام مقص جراحي حاد جدا ، قم بقص حوالي 0.5 - 1 مم من طرف ذيل الفأر. اجمع ما يقرب من 80 ميكرولتر من الدم المحيطي باستخدام أنابيب شعرية هيبارينية.
      ملاحظه: إذا تم جمع الدم بهذه الطريقة أكثر من ست مرات ، فيجب أن تكون إزالة الذيل متحفظة فيما يتعلق بكمية الذيل التي تمت إزالتها. مع تقدم القصاصات إلى الذيل ، يزداد القطر ، وينزف بشكل أسرع ، ويستغرق الشفاء وقتا أطول.

< p class = "jove_title" >2. فصل البلازما

1. نقل الدم باستخدام حقنة بصيلة (لطرده من الأنابيب الشعرية) إلى أنبوب ميكروتينر K₂EDTA المسمى ؛ اقلب 20 مرة لمنع التخثر><. ملاحظه: عادة ما يكون تخثر الدم من ارتشف الذيل سريعا. ومع ذلك ، إذا استمر النزيف لفترة أطول من ~ 2 دقيقة ، فاستخدم قلم رصاص / مسحوق نمطي للمساعدة في التخثر.
2. أنابيب جمع الدم بأجهزة الطرد المركزي وفقا لتعليمات الشركة المصنعة ونقل البلازما للتخزين (-20 درجة مئوية) حتى تصبح جاهزة لمزيد من التحليل.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات جهاز إرسال واستقبال نانو قابل للزرع للحيوانات مع الكانولا تروفان رقم الهوية-100 ب (1.25) كريم مخدر EMLA ليدوكائين (يتم الحصول عليه عن طريق الترسيب من خلال مرفق رعاية) الوصف الوصف د.ب 1/2 سم مكعب LO-DOSE U-100 حقنة الأنسولين 28G1 / 2 دينار بحريني #329461 أنابيب BD Microtainer مع K2EDTA دينار بحريني #365974 الطرد المركزي بيكمان كولتر أليجرا X-15R أنابيب الشعيرات الدموية FisherBrand (Heparinized) فيشر ساينتيك 22-260-950 مقياس الدم صياد 02-671-6 محلل MACuant 10 ميلتيني بيوتيك 130-096-343 فأر فطيرة قفص شركة برينتري العلمية MPC-1 ماوس الذيل مضيئة Retrainer شركة برينتري العلمية MTI الأمراض المنقولة جنسيا زرع قبضة المسدس تروفان IM-300 (1.25) "فئران NSG" إيماءة. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SzJ ، ذكر أو أنثى ، من 6 إلى 8 أسابيع JAX الفئران # 005557