مقالة منهجية

تقنية في المختبر لدراسة تفاعل الخلايا التائية مع الطبقات الدهنية المستوية المدعومة

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Steblyanko, M., et al. تقييم الواجهة المشبكية للخلايا التائية البشرية الأولية من الدم المحيطي والأنسجة اللمفاوية. J. Vis. Exp. (2018).

يوضح هذا الفيديو تقنية في المختبر لدراسة تكوين المشبك المناعي بين الخلايا التائية البشرية الأولية والطبقات الدهنية الثنائية المدعومة (SLB). تتفاعل بروتينات سطح الخلية التائية مع الروابط المعنية التي تم تجميدها على SLB لتشكيل مشبك مناعي ، تليها حركة الحبيبات اللايتية نحو المشبك ، والتي يتم تصورها باستخدام المجهر الفلوري.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على جمع العينات وفقا لإرشادات IRB الخاصة بالمعهد.

1. عزل خلايا CD4 + T لتحليل الصور

  1. قم بإذابة 1 مل من الكمية التي تحتوي على 107 خلايا أحادية النواة في الدم المحيطي المجمدة (PBMCs) أو خلايا أحادية النواة للعقدة الليمفاوية (LNMCs) من العينات التي تم جمعها. في غطاء معقم ، أضف الخلايا المذابة إلى 9 مل من RPMI المكمل بالبنسلين / الستربتومايسين والجلوتامين.
    1. الطرد المركزي للخلايا لمدة 10 دقائق عند 300 × جم عند 4 درجات مئوية ، وشفط المادة الطافية وأعد تعليق الخلايا في 5 مل من RPMI المكمل الذي يحتوي على 10٪ FBS (وسط كامل). احتضان الخلايا طوال الليل في حاضنة ثاني أكسيد الكربون2 عند 37 درجة مئوية.
  2. في اليوم التالي ، قم بتنقية خلايا CD4 + T عن طريق الفرز المناعي المغناطيسي السلبي باستخدام مجموعة متوفرة تجاريا وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  3. لقياس عدد خلايا CD4 + T المنقاة حديثا ، امزج 5 ميكرولتر من معلق الخلية بحجم متساو من محلول تريبان الأزرق. قم بتحميل مقياس كثافة الدم بمزيج أزرق خلية وجرب واحسب الخلايا الحية داخل 5 أقسام من مقياس كثافة الدم.
  4. خذ متوسط عدد الخلية وحدد عدد الخلايا في تعليق الخلية الأصلي: عدد الخلايا / 1 مل = متوسط العدد × 2 × 104. إذا كان العدد الإجمالي للخلايا المعزولة صغيرا جدا ، فاستخدم الخلايا كما هي دون عد.
    5. قم
  5. بالطرد المركزي للخلايا عند 300 × جم لمدة 10 دقائق وأعد تعليقها في مخزن مؤقت للفحص (20 ملي مولار HEPES ، درجة الحموضة 7.4 ، 137 ملي كلوريد الصوديوم ، 2 ملي Na2HPO4 ، 5 ملي مولار D-glucose ، 5 ملي مولار KCl ، 1 ملي مللي كلوريد2 ، 2 ملي كلوريدالكالسيوم 2 ، و 1٪ ألبومين مصل بشري) عند 105 خلايا / 50 ميكرولتر أو أقل واحتفظ بالخلايا عند 4 درجات مئوية (لمدة 1-2 ساعة) حتى تصبح جاهزة استخدم في التجارب.
  6. التخلص من جميع النفايات البيولوجية وفقا للإرشادات المؤسسية ذات الصلة.
  7. إذا رغبت في ذلك كمجموعة من الخلايا الضابطة ، قم بإعداد خلايا CD8 + T المنشطة من PBMC لدم الحبل السري ، ضع 107 خلايا في 5 مل من الوسط الكامل في قارورة ثقافة T25 مغطاة بمزيج من الأجسام المضادة ل CD3 ومضادة ل CD28 عند 10 ميكروغرام / مل و 1 ميكروغرام / مل ، على التوالي.
  8. في اليوم التالي ، قم بإزالة خلايا دم الحبل السري المنشطة من القارورة ، واغسلها 1x بوسط كامل طازج ، وقم بتوسيع الخلايا في وجود IL-2 المؤتلف (100 U / mL) لمدة أسبوعين.
  9. قم بتنقية خلايا CD8 + T لدم الحبل السري عن طريق الفرز المغناطيسي المناعي السلبي باستخدام المجموعة المتوفرة تجاريا وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. عد الخلايا وتبادل الوسائط إلى المخزن المؤقت للفحص كما هو موضح في الخطوات 1.3-1.6 لخلايا LN و PB CD8 + T.
< p class = "jove_title" >2. مكونات لإعداد الطبقات الدهنية المستوية
  1. قم بإعداد 3 أنواع من الجسيمات الشحمية كما هو موضح في مكان آخر: (أ) 0.4 ملي مولار DOPC (1،2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine) الجسيمات الشحمية ، (ب) 0.4 ملي مولار شحميات DOPC تحتوي على 33 مول٪ DOGS-NTA (1،2-dioleoyl-sn-glycero-3- [(N- (5-amino-1-carboxypentyl) حمض إيمينوديا أسيتيك) succinyl] (ملح الأمونيوم)) الدهون ، (ج) 0.4 ملي مولار دوبكسل الشحميات التي تحتوي على 4 مول٪ بيوتينيل-كاب-PE (1،2-ديولويل-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N- (غطاء البيوتين) (ملح الصوديوم)).
  2. تحضير محلول الكازين بنسبة 5٪ كما هو موضح سابقا.
    1. قم بإذابة 5 جم من مسحوق الكازين في 100 مل من الماء عالي النقاء وأضف 350 ميكرولتر من 10 M من هيدروكسيد الصوديوم. حرك كل شيء على محرك مغناطيسي عادي بسرعة بطيئة وفقا للمقياس المتاح ، في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين ، ثم طوال الليل عند 4 درجات مئوية. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.3 وقم بالطرد المركزي الفائق للمحلول لمدة ساعتين عند 100,000 × جم عند 4 درجات مئوية. قم بتصفية المادة الطافية بفلتر معقم 0.22 ميكرومتر وقم بتخزين المحلول في حصص عند -80 درجة مئوية.
      أنذر: يمكن أن يسبب محلول هيدروكسيد الصوديوم حروقا كيميائية وقد يؤدي إلى العمى الدائم عند ملامسة العينين. استخدم القفازات المطاطية وملابس السلامة وحماية العين عند التعامل مع هذه المادة الكيميائية أو محلولها.
  3. قم بتسمية الأجسام المضادة ل CD3 بالبيوتين لإنتاج جزيئات الأجسام المضادة أحادية البيوتينيل بنهج موصوف سابقا.
    1. تحضير محلول البيوتين-PEO4-NHS في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) عند 0.1 ملغم/مل. أضف 3.7 ميكرولتر من محلول البيوتين-PEO4-NHS إلى 1 مجم من الجسم المضاد في 0.5 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) يحتوي على 100 ملي مولار من بيكربونات الصوديوم.
    2. احتضان الخليط لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة. تحضير محلول من Alexa Fluor 488 NHS ester عند 10 مجم / مل في DMSO. أضف محلول Alexa Fluor 488 NHS ester إلى الجسم المضاد المسمى بواسطة Biotin-PEO4-NHS بزيادة 10 أضعاف المولار.
    3. احتضن الخليط لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع التحريك البطيء على محرك مغناطيسي عادي. افصل الصبغة غير المنضومة باستخدام كروماتوغرافيا استبعاد الحجم.
    4. حدد تركيز الجسم المضاد عن طريق قياس الكثافة البصرية لمحلول الجسم المضاد عند 280 نانومتر (A280). قم بقياس الكثافة البصرية للأجسام المضادة المصنفة عند 577 نانومتر (A577).
    5. حدد نسبة الصبغة إلى الجسم المضاد باستخدام المعادلة التالية:
      figure-protocol-1
      ملاحظه: اعثر على تفاصيل إضافية في بروتوكول الشركة المصنعة.
  4. التعبير عن بروتين جزيء الالتصاق بين الخلايا المؤتلف 1 (ICAM-1) في نظام تعبير ذبابة الفاكهة كما هو موضح سابقا.
    1. استنساخ ، مع ترميز (كدنا) ، المجال الخارجي ل ICAM-1 في ذبابة الفاكهة متجه التعبير pMT / V5-His مع محفز ميتالوثيونين محفز لإنتاج بروتين مؤتلف ملحق بعلامة His6 على الطرف C.
      2. شارك
    2. في نقل خلايا S2 مع ICAM-1 الناتج الذي يحتوي على البلازميد وناقل تعبير جيني (G418). اختر المعالجات المرسلة المستقرة باستخدام ذبابة الفاكهة الوسطى من شنايدر المكملة بمصل ربلة الساق الجنينية بنسبة 10٪ و0.5 ملغم/مل من G418 لمدة 3 أسابيع. قم بتوسيع الخلايا في وسط حشري خال من المصل وحث على تعبير البروتين مع 0.5 ملي مولار CuSO4 لمدة 3 أيام.
    3. قم بتركيز المادة الطافية للثقافة 10x وغسيل الكلى ضد PBS عبر مكثف التدفق العرضي كما هو موضح سابقا.
    4. ضع المادة الطافية المركزة على عمود يحتوي على سيفاروسينز بجسم مضاد أحادي النسيلة مضاد ل ICAM-1 ثابت تساهميا وقم بتصفية ICAM-1 المرتبط بمخزن جلايسين 50 ملي مولار ، درجة الحموضة 3.0. قم بتحييد بروتين ICAM-1 الملطوع على الفور باستخدام مخزن مؤقت 2 M Tris ، درجة الحموضة 8.0.
      5. قم
    5. بتحليل المادة المملوءة بجهاز تلفزيون ، درجة الحموضة 8.0 ، وأضف المادة المحللة إلى عمود يحتوي على Ni-NTA (حمض النيكل والنيتريلوأسيتيك) الاغاروز. ICAM-1 قابل للذوبان مع 200 ملي مولار إيميدازول ، درجة الحموضة 8.0. قم بتحليل المادة المملحة مقابل مخزن مؤقت PBS ، درجة الحموضة 8.0.
    6. قم بتسمية ICAM-1 المنقى باستخدام إستر Cyanine5 N-Hydroxysuccinimide (Cy5 NHS) وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
      ملاحظه: أفضل نسبة نهائية من الصبغة إلى البروتين هي 1: 1.
  5. إنتاج شظايا فاب من جسم مضاد مضاد ل CD107a عن طريق هضم غراء وتنقية شظايا فاب عن طريق كروماتوغرافيا التبادل الأيوني كما هو موضح سابقا. قم بتسمية شظايا فاب باستخدام إستر Alexa Fluor 568 NHS وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
< p class = "jove_title" >3. تشكيل طبقات ثنائية الدهون المستوية المدعومة بالزجاج
  1. قم بإعداد محلول سمكة المفترسة الحمضية الطازجة عن طريق خلط 140 مل من حمض الكبريتيك المركز و 60 مل من بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 30٪. اغسل أغطية الزجاج لشرائح التدفق عن طريق نقعها في محلول سمكة البيرانا الحمضية لمدة 30 دقيقة. امسك الغطاء الزجاجي باستخدام ملقط من نوع مقص البولي بروبلين.
    أنذر: محلول سمكة الضاري المفترسة مؤكسد قوي للغاية. تذكر ارتداء نظارات السلامة أو النظارات الواقية أو درع كامل الوجه مع قفازات مطاطية سميكة في جميع الأوقات أثناء التعامل مع المحلول. اعمل فقط مع محلول سمكة الضاري المفترسة تحت غطاء الدخان. تجنب تسخينه أو نقله أو رجه في أي وقت أثناء الاستخدام ، فقد ينفجر. اجمع نفايات أسماك الضاري المفترسة في زجاجة بها ثقب يحتوي على الرصاص. التواصل مع لجنة السلامة المؤسسية حول الاستخدام السليم للنفايات.
  2. اشطف الغطاء المغسول 7 مرات بالماء فائق النقاء عن طريق نقلها بالتتابع إلى أكواب تحتوي على مياه عذبة. ضع الغطاء المبلل جانبا للسماح للماء المتبقي بالتدحرج من الزجاج النظيف ، تاركا الزجاج الجاف وراءه.
    1. بدلا من ذلك، استخدم طرف ماصة متصل بمضخة تفريغ لإزالة قطرات الماء المتبقية بعناية من الغطاء.
  3. في الغطاء المعقم ، قم بإجراء تخفيفات للدهون المختلفة لإنتاج مزيج الجسيمات الشحمية لصنع طبقات ثنائية أولا ، امزج 37 ميكرولتر من الجسيمات الشحمية DOPC و 3 ميكرولتر من الجسيمات الشحمية Biotinyl-Cap-PE. ثانيا ، امزج 14 ميكرولتر من الجسيمات الشحمية DOPC و 15 ميكرولتر من الجسيمات الشحمية DOGS-NTA. ثالثا ، أضف 1 ميكرولتر من المزيج الأول إلى 29 ميكرولتر من المزيج الثاني لتصنيع خليط الجسيم الشحمي النهائي.
  4. في غطاء المحرك المعقم ، قم بإعداد مساحة عمل مع أغطية جافة بالقرب منك. Aliquot 2 ميكرولتر من خليط الجسيم الشحمي النهائي (انظر الخطوة 3.3) بدقة في وسط قناة منزلقة ذاتية اللصق. قم بمحاذاة الغطاء النظيف والجاف على الفور وبدقة شديدة مع الشريحة وقم بخفض الغطاء برفق على الجانب اللاصق من الشريحة.
    1. في حالة تحضير أكثر من شريحة واحدة ، اعمل على شريحة واحدة في كل مرة لأن خليط الجسيمات الشحمية يتبخر بسرعة. اقلب الشريحة واستخدم الحلقة الخارجية من ملقط من نوع مقص البولي بروبلين لتطبيق ضغط لطيف على التلامس المحيطي للغطاء مع الشريحة ، مع التأكد من أن الانزلاق متصل بإحكام بالشريحة لمنع التسرب.
      ملاحظه: لا تضغط على قنوات الشريحة لتجنب كسر أو تكسير الغطاء.
    2. اقلب الشريحة مرة أخرى وحدد موضع الطبقة الثنائية المشكلة ، والتي تبدو وكأنها قطرة بين شريحة الغطاء وشريحة القناة ، عن طريق رسم 4 نقاط بعلامة دائمة حول الطبقة الثنائية على جانب الشريحة الخارجية للتجميع.
  5. قبل الحقن الأول لسائل في القناة ، قم بتعيين منفذ واحد من القناة كمنفذ دخول والآخر كمنفذ خروج وحافظ على هذا التعيين طوال التجربة.
  6. لتجنب تكوين فقاعات، أدخل طرف الماصة مباشرة في منفذ دخول القناة. املأ قنوات الشريحة ببطء ب 50 ميكرولتر من المخزن المؤقت للفحص الدافئ (على الأقل في درجة حرارة الغرفة) (انظر الخطوة 1.5 للحصول على تكوين المخزن المؤقت).
  7. قم بإعداد محلول كلوريد النيكل (II) 0.5 متر. قم بإذابة 2 مل من محلول الكازين في حمام مائي عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة واستكمله بمحلول كلوريد النيكل بتركيز نهائي قدره 200 ميكرومتر.
  8. اغسل الطبقات الثنائية عن طريق حقن 100 ميكرولتر من محلول الكازين أولا في منفذ دخول القناة ثم إزالة 100 ميكرولتر على الفور من منفذ الخروج على الشريحة عن طريق سحب العينات. قم بسد الطبقات الثنائية بنفس المحلول عن طريق حقن 100 ميكرولتر من محلول الكازين في منفذ دخول كل قناة واحتضان الشريحة لمدة 45 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  9. قم بإذابة كميات من بروتينات Cy5-ICAM-1-His6 والستربتافيدين. اجمع البروتينات في المخزن المؤقت للفحص بالتركيز النهائي البالغ 2 ميكروغرام / مل لكل منهما. الطرد المركزي المحلول لمدة 30 دقيقة عند 20,000 × جم و 4 درجات مئوية لإزالة أي مجاميع.
  10. قم بإزالة باقي محلول الحظر من منفذ الخروج لقناة الانزلاق عن طريق سحب العينات. حقن 100 ميكرولتر من المحلول المحتوي على ICAM-1 والستربتافيدين في منفذ الدخول.
  11. احتضن الشريحة لمدة 45 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. قم بإزالة أي فائض من محلول البروتين من منفذ الخروج. اغسل الطبقة الثنائية 2x عن طريق حقن 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت للفحص أولا في منفذ دخول القناة ثم إزالة 100 ميكرولتر على الفور من منفذ الخروج.
  12. قم بتخفيف الجسم المضاد المضاد ل CD3 الذي يحمل علامة Alexa-Fluor-488 باستخدام المخزن المؤقت للفحص إلى تركيز نهائي يبلغ 2 ميكروغرام / مل. قم بحقن 100 ميكرولتر من محلول الجسم المضاد في منفذ دخول الشريحة واحتضانه لمدة 45 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. قم بإزالة أي فائض من محلول البروتين من منفذ الخروج. اغسل الطبقة الثنائية 2x ب 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت للفحص كما في الخطوة 3.11.

4. تصوير تفاعل الخلايا التائية مع الطبقة الثنائية المستوية

  1. قم بتسخين المرحلة والهدف من مجهر مضان الانعكاس الداخلي متحد البؤر أو الكلي (TIRF) حتى يتم موازنة درجة الحرارة عند 37 درجة مئوية. قم بإعداد الشريحة مع الطبقة (الطبقات) الثنائية على المسرح المسخن. انقل المسرح إلى الموضع المناسب وفقا لعلامات الحبر وركز على الطبقة الثنائية التي تستخدم مضان جزيئات ICAM-1 المسمى Cy.
    1. استخدم هدف 61X للمجهر متحد البؤر ، أو هدف 100X لمجهر TIRF ، مع إعدادات المرشح المناسبة.
  2. لتصوير إطلاق الحبيبات بواسطة الفحص المجهري TIRF ، أضف شظايا الجسم المضاد المضاد ل CD107a المسمى Alexa-Fluor-568 إلى تعليق الخلية بتركيز نهائي قدره 4 ميكروغرام / مل قبل حقن الخلايا في منافذ الدخول.
    1. أعد تعليق الخلايا التائية CD4 + المحضرة المعزولة من LN PB أو دم الحبل السري وحقن 50 ميكرولتر من معلق الخلية في منفذ دخول القناة المنزلقة التي تحتوي على الطبقة الثنائية.
  3. اختر العدد المطلوب من الحقول وسجل الصور لكل حقل 1x كل دقيقتين لمدة 30 دقيقة بعد الحقن.
  4. استغل المجال الساطع والضوء المنعكس والقنوات الفلورية (Alexa 488 و Cy5) للمجهر متحد البؤر للحصول على الصور. استخدم وضع TIRF لمضان Alexa-Fluor-488 و Alexa-Fluor-568 والمجال العريض لمضان Cy5 ، بالإضافة إلى تصوير المجال الساطع ، على مجهر TIRF.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات طقم عزل الخلايا التائية CD4 ، بشري ميلتينيل بيوتيك 130-096-533 طقم عزل الخلايا التائية CD8 ، بشري ميلتينيل بيوتيك 130-096-495 دوبكسل أفانتي بولر ليبيدس 850375 ج NTA أفانتي بولر ليبيدس 790528 ج غطاء البيوتينيل PE أفانتي بولر ليبيدس 870273 ج مصل البشري الألبومين أوكتافارما الولايات المتحدة الأمريكية NDC 68982-643-01 لزجة الشريحة السادس 0.4 المرجع نفسه 80608 أغطية للشرائح اللاصقة المرجع نفسه 10812 [م] غرفة Bioptech FCS2 بيوبتك 060319-2-03 الجسم المضاد ل CD3 ثيرمو فيشر العلمي 16-0037-81 استنساخ OKT3 ، خلايا الورم الهجين متوفرة من ATCC الأجسام المضادة CD28 جينيتكس GTX14664 9.3 استنساخ الكازين سيغما سي 5890 البيوتين - PEO4 - NHS ثيرمو فيشر العلمي هاتف: 21329 DMSO سيغما د2650-5 طقم وضع العلامات على البروتين Alexa Fluor 488 مع عمود لتنقية البروتين المسمى ثيرمو فيشر العلمي أ 10235 طقم وضع العلامات على البروتين Alexa Fluor 568 مع عمود لتنقية البروتين المسمى ثيرمو فيشر العلمي أ 10238 Amersham Cy5 NHS Ester جنرال إلكتريك لعلوم الحياة PA15101 pMT / V5-له أ ، ب ، ج ذبابة الفاكهة متجهات التعبير ثيرمو فيشر العلمي V412020 pcopneo ، G418 ذبابة الفاكهة متجه التعبير للاختيار الإيجابي ATCC 37409 مصل خالية من ذبابة الوسائط الحشرات-XPRESS لونزا 12-730 س الورم الهجين YN1 / 1.7.4 ATCC CRL1878 يفرز الورم الهجين جسما مضادا ضد ICAM-1. سيفاروسي بروميد السيانوجين المنشط 4 ب سيجما ألدريتش سي 9142 تستخدم لتحضير سيفاروسي مع جسم مضاد مضاد مضاد ل ICAM. مكثف التدفق العرضي MasterFlex كول بارمر 77601-60 7592-40 يستخدم في ICAM-1 الذي يحتوي على تركيز طافي وغسيل الكلى يحتوي على ICAM-1 أنظمة التدفق المماسي لمختبر Centramate مختبر بال FS002K10 OS010T12 FS005K10 يستخدم في ICAM-1 الذي يحتوي على تركيز طافي وغسيل الكلى يحتوي على ICAM-1 ني-NTA أغاروز كياجين 30210 أنابيب غسيل الكلى أطياف / بور 131384 غراء من البابايا اللاتكس سيغما ص 3125 الفأر الأجسام المضادة للإنسان ضد CD107a BD Bioscences 555798 استنساخ H4A3 قفازات Ansell الزرقاء الطبيعية فيشر ساينتيك 19-014-539 ملقط من نوع مقص البولي بروبيلين Nalgene ثيرمو فيشر العلمي 6320-0010 ستربتافيدين بروزيم SA10 مجهر متحد البؤر نيكون مجهر نيكون TiE المقلوب مزود ب PFS للتحكم في استقرار الصورة على المدى الطويل ، وأهداف الزيت 60x ، و 4 ليزر مع خطوط إثارة عند 405 و 458 و 488 و 514 و 561 و 640 نانومتر ، و 2 كاشف GaAsP و 2 PMTs عالي الحساسية ، ضوء إرسال DIC ، مرحلة X و Y ، Z قابلة للبرمجة لمواضع متعددة وخياطة المساحات الكبيرة ، وظائف الفاصل الزمني ، غرفة Tokai-Hit التي يتم التحكم فيها بدرجة الحرارة وثاني أكسيد الكربون للتصوير المباشر وطاولة العزل المضادة للاهتزاز مجهر TIRF أندور نظام Andor Revolution XD مجهز بمصباح نيكون TIRF-E ، ليزر بخطوط 405 ، 488 ، 561 و 640 خطا ، ضوء منقول DIC ، رأس قرص دوارة Yokogawa CSU-X1 للتصوير متحد البؤر ، هدف 100 / 1.49 NA ، كاميرا Andor iXon X3 EM-CCD ، سخان موضوعي ، ومرحلة آلية كهرضغطية مع نظام التركيز المثالي (PFS)

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

TIRF TCR CD3 ICAM 1 Fab CD107a

مقالات ذات صلة