تقنية التحويل الضوئي لاستكشاف ديناميكيات الخلايا الالتهابية في الشرانق الحشرية

Method Article

تقنية التحويل الضوئي لاستكشاف ديناميكيات الخلايا الالتهابية في الشرانق الحشرية

July 8th, 2025

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

< p class = "jove_content" >المصدر: Weavers ، H. et al. ، تتبع طويل الأمد في الجسم الحي لديناميكيات الخلايا الالتهابية داخل ذبابة الفاكهة الشرانق.J. Vis. Exp. (2018)

يوضح الفيديو استخدام التحويل الضوئي لدراسة ديناميكيات الخلايا الالتهابية في ذبابة الفاكهة الشرانق. تنجذب الخلايا الدموية الخضراء إلى الظهارة المصابة ، تليها الهجرة البعيدة. يحول التحويل الضوئي بعض الخلايا الدموية من الأخضر إلى الأحمر ، مما يسهل تتبع حركتها.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

< p class = "jove_content">يتكون هذا البروتوكول من أربع خطوات متسلسلة رئيسية: (1) تحضير مخزون ذبابة الفاكهة وتحديد مراحل ذبابة الفاكهة الشرانق ، (2) تشريح العذراء وتركيبها ، (3) جرح العذراء ، (4) في الجسم الحي التصوير متحد البؤر بفاصل زمني.

< p class = "jove_title" >1. تحضير مخزون ذبابة الفاكهة وتنظيم الشرانق

احصل على مخزون ذبابة الفاكهة المناسب (انظر المقدمة وجدول المواد).
اجمع الذباب البالغ الصغير الأصحاء من النمط الجيني المناسب.
1. اختر الذباب البالغ باستخدام وسادات غاز ثاني أكسيد الكربون لتخدير الذباب لفترة وجيزة وفرشاة رسم دقيقة لنقل الذباب من النمط الجيني أو الجنس المناسب....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
الشكل 1: ذبابة الفاكهة خادرة تحضير الجرح والتصوير الحي. (أ) ذبابة الفاكهة قبل الشرانق البيضاء التي تم جمعها في 0 ساعة APF ، مع الإشارة إلى النهاية الأمامية بواسطة زوائد التنفس المقلوبة (الفتحات التنفسية). (ب) بعد رفع شرانق APF البيضاء 0h لمدة 18 ساعة عند 25 درجة مئوية ، تظهر الشرانق باللون البني. يجب أن يبدأ تشريح حالة العذراء في المنطقة الأمامية (ا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments ذبابة الفاكهة الأسهم في كل مكان GFP-الموسومة E-cadherin; Ubi-p63E-shg.GFP; (الحقوق الثانية) مركز كيوتو للأوراق المالية ، DGRC #109007 تقود تسلسلات المروج Ubi-p63E التعبير عن ذبابة الفاكهة E-cadherin (بندقية) الموسومة في نهاية الطرف C ب GFP. في كل مكان GFP-موسومة E-cadherin;; Ubi-p63E-shg.GFP (III) مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة (جامعة إنديانا) #58742 تقود تسلسلات المروج Ubi-p63E التعبير عن ذبابة الفاكهة E-cadherin (بندقية) الموسومة في نهاية الطرف C ب GFP. موسين موسومة GFP في كل مكان P{sGMCA}3.1 مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة (جامعة إنديانا) #59023 يقود مروج / محسن sqh المعبر عنه في كل مكان التعبير عن جزء من Moesin (يتضمن تسلسلات ربط الأكتين) الموسومة ب GFPS65T. سائق ثعبان الدم المحدد Gal4 ; srp-Gal4 ؛ تم إنشاؤه بواسطة Katja Bruckner تم إنشاؤه بواسطة Katja Bruckner يتم التحكم في التعبير عن Scer \ GAL4 المدمجة في ذيل polyA بواسطة تسلسلين جينيين من المنبع ذبابة الفاكهة الثعبان. المرجع: بروكنر ، ك. ، كوكيل ، إل ، دوتشيك ، ب. ، لوك ، سي إم ، روث ، ب. ، بيريمون ، ن. يتحكم مستقبلات PDGF / VEGF في بقاء خلايا الدم في ذبابة الفاكهة. خلية التطوير. 7 (1) ، 73-84 ، DOI: 10.1016 / j.devcel.2004.06.007 (2004). UAS-nuclearRFP w1118;; P{UAS-RedStinger}6 مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة (جامعة إنديانا) #8545 أو #8547 تدفع التسلسلات التنظيمية للطائرات بدون طيار التعبير عن شكل DsRed.T4 من طلب تقديم العروض الذي يتم تمييزه في الطرف C بإشارة توطين نووية UAS-cytoplasmicGFP ;; P{UAS-GFP. S65T} مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة (جامعة إنديانا) تتوفر أسهم متعددة (على سبيل المثال # 1522) التعبير عن إصدار S65T من GFP بواسطة التسلسلات التنظيمية للطائرات بدون طيار ؛ يظهر متغير S65T سطوعا متزايدا. UAS-photoconvertibleKaede w1118;; P{UAS-Kaede.A}3 مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة (جامعة إنديانا) #26161 ينبعث بروتين Kaede من التألق الأخضر الفاتح بعد التوليف ، ولكنه يتغير بكفاءة إلى مضان أحمر مستقر ساطع عند التشعيع بالأشعة فوق البنفسجية. معكرونة الاسكواش الموسومة ب GFP w1118 ؛ P{sqh-GFP.RLC} مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة (جامعة إنديانا) #57145 يتم التعبير عن منطقة الترميز sqh ، التي تم تمييزها في الطرف C بعلامة T: Avic \ GFPS65T ، تحت سيطرة مروج sqh الطبيعي. مكونات وسائط طعام الذباب يتم تصنيع وسائط طعام الذباب وفقا للإجراءات القياسية (انظر Greenspan، R. 1997. دفع الذبابة: نظرية وممارسة ذبابة الفاكهة الوراثية. مطبعة كولد سبرينج هاربور 1-191 ص) ذرة الشوفان البري ، بريستول ، المملكة المتحدة (أو مورد مكافئ) اتصل بالمورد مباشرة عضوي دقيق الصويا الشوفان البري ، بريستول ، المملكة المتحدة (أو مورد مكافئ) اتصل بالمورد مباشرة عضوي مستخلص الشعير الشوفان البري ، بريستول ، المملكة المتحدة (أو مورد مكافئ) اتصل بالمورد مباشرة عضوي دبس الشوفان البري ، بريستول ، المملكة المتحدة (أو مورد مكافئ) اتصل بالمورد مباشرة عضوي ديفكو أجار BD Biosciences ، فيشر ساینتفيك DF0142-15-2 لتحضير طعام الذباب حمض البروبيونيك سيغما 402907 لتحضير طعام الذباب نيباجين سيغما 79721 لتحضير طعام الذباب خميرة الخباز المجففة ريدستار ، دوتشر العلمية ، المملكة المتحدة المحدودة ريدستار ، دوتشر العلمية ، المملكة المتحدة المحدودة لتحضير طعام الذباب تحضير العينة وتركيبها بارافيلم سيغما P7793-1EA لإعداد غراء السباعي فرشاة رسم السمور الناعمة دالر روني (أو ما يعادلها) # 0 أو 1 ملقط فيشر العلمية (أو أدوات العلوم الدقيقة) NC9404145 دومون # 5 أطباق ذات قاع زجاجي للتصوير ماتيك P35G-0-10-C نقترح استخدام أطباق بتري مقاس 35 مم ، مع غطاء زجاجي 10 مم على الأقل ، 0.085-0.13 مم ، غير مطلي. ستمكن الأطباق ذات الآبار الصغيرة الأكبر من تركيب أعداد متزايدة من الشرانق وتصويرها في تجربة واحدة. هيبتان سيغما 51730-5 مل لإعداد غراء السباعي شريط لاصق مزدوج الوجهين (مثل سكوتش) أجار العلمية أ جي 263 لإعداد غراء السباعي أنبوب 50 مل (لغراء الهبتان) أنابيب الصقر من فيشر ساينتفيك 14-432-22 لإعداد غراء السباعي شرائح المجهر الزجاجي أجار العلمية AGL4244 لتشريح ذبابة الفاكهة الشرانق تشريح مجهر ستيريو باستخدام المجال الساطع لايكا (أو ما يعادلها) م 50 لتشريح ذبابة الفاكهة الشرانق مقص دقيق جون فايس انترناشيونال 103123 مقص أبحاث مصغر (مستقيم) الاستئصال بالليزر والتصوير ليزر استئصال النيتوجين الأطياف الفيزيائية (أو ما يعادلها أندور) الموديل VSL-337ND-S بالنسبة للجرح ، يجب إرفاق هذا بنظام تصوير واسع المجال مجهر المسح الضوئي بالليزر متحد البؤر متعدد الليزر (CLSM) لايكا (أو ما يعادلها) TCS AOBS SP8 أو SP5-II متصل بمجهر Leica DMi8 المقلوب epifluorscope (أو ما يعادله) من الناحية المثالية ، بما في ذلك مرحلة آلية للمسح متعدد المواقع و "الفسيفساء" ، بالإضافة إلى كاشفات GaAsP "الهجينة" (التي توفر حساسية أكبر بكثير وتعزيز الإشارة المنخفضة) غرفة بيئية خدمات التصوير الحي (أو ما يعادلها) "نظام التحكم في درجة الحرارة المجهرية" متصل بالمجهر متحد البؤر للتحكم في درجة الحرارة أثناء التصوير برنامج تحليل الصور وحدة برمجيات FRAP لايكا (أو ما يعادلها) وحدة برنامج CLSM FRAP لإجراء التحويل الضوئي للفلوروفورات القابلة للتحويل الضوئي مثل Kaede ImageJ (برنامج تحليل الصور) المعاهد الوطنية للصحة (NIH) https://imagej.nih.gov/ij/ شنايدر ، سي إيه ، راسباند ، دبليو إس ، إليسيري ، ك.د. "صورة المعاهد الوطنية للصحة إلى ImageJ: 25 عاما من تحليل الصور". طرق الطبيعة 9, 671-675, 2012. البرنامج المساعد ImageJ "التتبع اليدوي" المعاهد الوطنية للصحة (NIH) https://imagej.net/Manual_Tracking البرنامج المساعد ImageJ "TrackMate" ImageJ ، المعاهد الوطنية للصحة https://imagej.net/TrackMate تينيفيز ، جي واي ؛ Perry، N. & Schindelin، J. et al. (2016) ، "TrackMate: منصة مفتوحة وقابلة للتوسيع لتتبع الجسيم الواحد." ، الطرق 115: 80-90 ، PMID 27713081 Volocity (برنامج تصوير ثلاثي الأبعاد عالي الأداء) بيركين إلمر Volocity 6.3 لتحليل الصور IMARIS (برنامج تحليل الصور) Bitplane IMARIS لعلماء الأحياء الخلوية لتحليل الصور

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

تقنية التحويل الضوئي لاستكشاف ديناميكيات الخلايا الالتهابية في الشرانق الحشرية

In This Article

Abstract

Protocol

Results

Disclosures

Materials

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles