Method Article

مقايسة انقسام الببتيد الفلوروجينيك لفحص النشاط المحلل للبروتياز

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Jaimes، J. A.، et al. A Fluorogenic Peptide Cleavage Assay لفحص النشاط المحلل للبروتين: تطبيقات لتنشيط بروتين سبايك لفيروس كورونا. J. Vis. إكسب. (2019).

يوضح هذا الفيديو فحصا لفحص النشاط المحلل للبروتياز للبروتياز باستخدام الببتيدات الفلورية. يتعرف البروتياز على موقع الانقسام الخاص به على الببتيد ، ويشقه ويفصل المروي عن الفلوروفور ، مما يتيح انبعاثه الفلوري. يتم الكشف عن إشارة التألق وتحليلها للتحقق من كفاءة الانقسام لمتغيرات الببتيد المختلفة.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. تصميم وتحضير الببتيدات

  1. الحصول على تسلسل بروتين الاندماج محل الاهتمام من قاعدة بيانات عامة مثل NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) أو قاعدة بيانات مسببات الأمراض الفيروسية (https://www.viprbrc.org). اختر موقع التعرف على البروتياز الذي يسبق ببتيد الاندماج وقم بتضمين 2-3 أحماض أمينية في المنبع واتجاه مجرى هذا التسلسل.
  2. عند طلب الببتيدات ، قم بتعديلها باستخدام زوج FRET 7-methoxycoumarin-4-yl acetyl (MCA) في الطرف N و N-2،4-dinitrophenyl (DNP) في الطرف C.
    ملاحظه: يقدم العديد من الموردين هذه التعديلات. السعر ووقت التسليم يعتمدان على المورد المفضل. ومع ذلك ، توجد تعديلات بديلة تختلف في الحساسية وتتطلب تعد....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments الببتيدات بيوماتيك غير متاح فورين NEB P8077S التربسين ، معالج TPCK سيجما ألدريتش 4352157-1 كيلو طن هيبس سيجما ألدريتش إتش 3375 CaCl2 سيجما ألدريتش سي 1016 2-ميركابتو إيثانول سيجما ألدريتش M6250 تريتون-X100 سيجما ألدريتش X100 برنامج تلفزيوني كورنينج 21-040-السيرة الذاتية SpectraMax Gemini XPS الأجهزة الجزيئية XPS سوفت ماكس برو 6.5.1 الأجهزة الجزيئية غير متاح صفيحة 96 بئر (بوليسترين أسود صلب مع قاع مسطح وغير معالج) كوستار 3915 أنابيب التخميد الخفيفة مختبر واتسون 131-915BL أو 131-915BR

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Fluorogenic Peptide Cleavage AssayProtease Proteolytic ActivityFluorophore Quencher SystemFluorescence Plate ReaderProtease Cleavage SiteSpike Protein ActivationPeptide Variant ScreeningProtease Activity MeasurementFluorescence Signal DetectionProteolytic Cleavage Efficiency

Related Articles