قياس تثبيط نمو الشتلات الناجم عن المناعة

الملخص

المصدر: Bredow، M. et al. ، فحوصات تثبيط نمو الشتلات وانفجار الأكسدة التي يسببها النمط في نبات الأرابيدوبسيس ثاليانا. J. Vis. Exp. (147) ، (2019).

يوضح هذا الفيديو مقايسة تثبيط نمو الشتلات في نبات نبات ن يتم تحديد تأثير زيادة تركيز محفز الببتيد المناعي على نمو الشتلات.

البروتوكول

p class = "jove_title" >1. فحص تثبيط نمو الشتلات

1. تعقيم البذور وزرعها على ألواح Murashige و Skoog (MS).
   1. تحضير نصف قوة معقمة (0.5x) MS متوسطة (2.16 جم / لتر) تحتوي على 0.8٪ أجار [وزن / حجم]. صب الوسائط في أطباق (90 × 15 مم) في غطاء تدفق رقائقي.
   2. تعقيم ما يقرب من 100 بذرة في أنبوب طرد مركزي دقيق عن طريق الغسيل ب 1 مل من الإيثانول بنسبة 70٪ لمدة دقيقتين وإزالته عن طريق الشفط. أضف 1 مل من المبيض بنسبة 40٪ وهز برفق لمدة 17 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. قم بإزالة المبيض عن طريق الشفط واغسله ثلاث مرات في 1 مل من الماء المعقم لمدة 5 دقائق. أعلق في 1 مل من أجار معقم 0.1٪ أجار.
      ملاحظه: بدلا من ذلك ، استخدم بروتوكول تعقيم بذور....

النتائج

الشكل 1. مقايسة تثبيط نمو الشتلات التي يسببها الإليسيتور في نبات الأرابيدوبسيس. (أ) زرع الشتلات على أجار MS وتنمو لمدة 3-4 أيام في ظل ظروف اليوم القصير القياسية. (ب) زرع الشتلات في 48 لوحة بئر تحتوي على وسط MS أو MS تحتوي على تركيزات مختلفة من elf18. (ج) بعد 8-12 يوما ، قم بتقييم حجم الشتلات بصريا ثم قم بقياس الوزن الطازج باستخدام مقياس تحليلي لتحديد النسبة المئوية لتثبيط النمو.

....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 8 أطباق معقمة بغطاء سيجما ألدريتش CLS3548 مقياس تحليلي مع مسودة شيد VWR VWR-225AC يمكن استخدام أي مقياس تحليلي قياسي لمقايسات بدء النمو ، ومع ذلك ، فإن إخراج الكمبيوتر المباشر هو الأمثل. BioHit mLine ميكانيكية متعددة القنوات 12 (30-300 ميكرولتر سارتوريوس 725240 يمكن استخدام أي ماصة متعددة القنوات، وكذلك ماصة واحدة إذا لزم الأمر. قزم 18 (AcSKEKFERTKPHVNVGTIG) EZ Biolab [كب7211] قم بتخزين 10 ملي مولار من الببتيد عند -80 درجة مئوية في أنابيب ربط منخفضة البروتين. عند الذوبان ، قم بتخزين 100 ميكرومتر من المخزون عند -20 درجة مئوية. أملاح Murisage و Skoog القاعدية مختبرات Cedarlane MSP09-100LT يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية. ألواح البوليسترين الأبيض 96 بئر فيشر ساينتيك 07-200-589