مقايسة للكشف عن إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية في أنسجة الأرز عند الاستنباط المناعي

الملخص

المصدر: Wang، Y.، et al. الكشف في الوقت الفعلي عن إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية في الاستجابة المناعية في الأرز باستخدام فحص التلألؤ الكيميائي. J. Vis. إكسب. (2022).

يوضح هذا الفيديو فحصا للكشف في الوقت الفعلي عن إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) في أنسجة الأرز عند استنباط النمط الجزيئي المرتبط بالعامل الممرض (PAMP). تتعرض أجزاء الغمد المقطوعة وأقراص الأوراق لببتيد مشتق من السوط البكتيري يعمل كPAMP. عند التعرف على الببتيد عبر مستقبلات التعرف على الأنماط (PRRs) على الخلايا النباتية ، يحدث إنتاج سريع وعابر ل ROS ، والذي يتم اكتشافه عن طريق مقايسة التلألؤ الكيميائي.

البروتوكول

ملاحظة: ينطبق البروتوكول على الأنسجة النباتية المختلفة. تم استخدام غمد الأرز وأقراص الأوراق في هذا البروتوكول للكشف عن أنواع الأكسجين التفاعلية عند استنباط PAMP. نظرا لأن الاختلافات تنشأ بشكل أساسي بسبب طريقة أخذ العينات ، يتم وصف الإجراءات الشائعة فقط أدناه ، مع ذكر خطوات محددة عند الضرورة.

فئة < ص = "jove_title" >1. تحضير الأنسجة ومعالجتها

1. غمد الأرز
   1. قم بتقطيع الغمد من شتلات الأرز التي يبلغ عمرها 10 أيام إلى شرائح 3 مم بشفرة حلاقة حادة أو شفرة جراحية للمعالجة المسبقة قبل يوم واحد من اختبار ROS (الشكل 1 ب).
   2. ضع خمسة أجزاء غمد في بئر فردي من صفيحة ميكروتيتر مكونة من 96 بئرا تح....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: حالة نمو ومراحل شتلات الأرز لأخذ عينات من الغمد وأجزاء من غمد الأرز وأوراق الأرز المستخدمة في الفحص. (أ) يمكن أخذ عينات من شتلات الأرز المزروعة على وسط 1/2 مللي ثانية في ظل ظروف معقمة لمدة 10 أيام لفحص ROS. استزرعت بذور الأرز المعقمة على 1/2 مللي ثانية متوسطة ونمت في فترة ضوئية 12 ساعة فاتحة / 12 ساعة مظلمة في قارورة زجاجية شفافة قطرها 8.5 سم وارتفاعها 15 سم. (

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 96 بئر لوحة ميكروتيتر دبليو إتش بي دبليو إتش بي -96-01 إف إل جي 22 سانغون للتكنولوجيا الحيوية ص 20973 بامب الجيل 5 بيوتك برمجيات L-012 فوجي فيلم هاتف 120-04891 8-أمينو-5-كلورو-7-فينيل-2،3-ثنائي هيدروبيريدو [3،4-د] بيريدازين-1،4-ديون، CAS #: 143556-24-5 قارئ اللوحة الدقيقة بيوتك التآزر 2 بيروكسيداز من الفجل الحار (HRP) سيغما ص 8375 العينات ميلتكس 15110-40 تريس سانغون للتكنولوجيا الحيوية A610195