تحديد وتعداد الخلايا المناعية في سائل الغسيل القصبي السنخي عن طريق قياس التدفق الخلوي

الملخص

المصدر: Van Hoecke، L. et al.، غسل القصبات الهوائية لرئتي الفئران لتحليل تسلل الخلايا الالتهابية.J. Vis. Exp.(2017)

يوضح هذا الفيديو استخدام قياس التدفق الخلوي لتحديد وحساب الخلايا المناعية المختلفة في سائل غسل القصبات الهوائية. في البداية ، يتم تحديد الخلايا المناعية المفردة باستخدام صبغة قابلة للحياة ، متبوعة بالتلوين التفاضلي لبروتينات العلامات السطحية ، مما يتيح التعداد الدقيق لكل نوع من أنواع الخلايا.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. التحضير

1. سائل الغسيل
   1. تحضير محلول ملحي متوازن مع 100 ميكرومتر حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA).
      ملاحظه: لقياس مستويات البروتين في سائل غسل القصبات الهوائية (BAL) ، يوصى بإضافة مثبطات البروتياز لمنع نشاط البروتياز في سائل BAL.
2. قسطر
   1. اصنع قسطرة عن طريق إدخال إبرة 23 جم في أنبوب بولي إيثيلين بلاستيكي شفاف 21 جم (القطر الداخلي: 0.58 مم ، القطر الخارجي: 0.965 مم ، والطول: 0.5 سم). يمكن أيضا استخدام القسطرة الجاهزة.
   <....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: استراتيجية البوابات للكشف عن التدفق الخلوي للضامة والخلايا المتغصنة والخلايا التائية والخلايا البائية والعدلات والحمضات في سائل BAL. تم عزل خلايا BAL باستخدام بروتوكول BAL الموصوف. تم عزل الخلايا من الفئران بعد 24 ساعة من تقطير عديدات السكاريد الدهنية داخل القصبة الهوائية. تم تحديد عد الخرز والخلايا بناء على خصائص التشتت الأمامي والجانبي. في بوابة الخلية ، تم تحديد الخلايا المفردة.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات محلول ملح متوازن ثيرمو فيشر العلمي 14175-129 حمض الخليك إيثيل ينديامين تترا سيجما ألدريتش E6511 مزعجه 23 جم × 1 1/4 إبرة هينكي ساس وولف 4710006030 الحجم: 0,60 × 30 ملم 26 جم × 1/2 نيلدا هينكي ساس وولف 4710004512 الحجم: 0،45 * 12 ملم أنابيب بلاستيكية BD التكنولوجيا الطبية 427411 أنابيب البولي إيثيلين ، معرف 0.58 مم (.023 بوصة) OD. 965 مم (0.38 بوصة) 30.5 م (100 بوصة) البنتوباربيتال الصوديوم كيلا نيفادا 514 محلول ملحي مخزن بالفوسفات لونزا BE17-516F PBS بدون Ca ++ Mg ++ أو أحمر الفينول ؛ مفلتر معقم محاقن 1 مل هينكي ساس وولف 5010.200 فولت 0 غير حراري وغير سام ملقط أدوات العلوم الجميلة GmbH 91197-00 مقص جراحي أدوات العلوم الجميلة GmbH 91460-11 أنبوب الطرد المركزي 50 مل ال. جيير 7696705 خال من الرناس / دنازي / السموم الداخلية أنبوب الطرد المركزي 15 مل ال. جيير 7696702 خال من الرناس / دنازي / السموم الداخلية أنبوب الطرد المركزي الدقيق 1,5 مل سيجما ألدريتش 0030 120.094 روبلين أجهزة الطرد المركزي الدقيقة سيجما ألدريتش 5415 ص الطرد المركزي ثيرمو فيشر العلمي 75004030 محلول التحلل من الأمونيوم وكلوريد البوتاسيوم (ACK) لونزا 10-548 ه معقمة تصفية حي / ميت -efluor506 العلوم الحيوية 65-0866-18 صبغة قابلة للإصلاح CD11c-PE-cy7 العلوم البيولوجية الإلكترونية 25-0114-81 سيجليكف-بي إي BD Pharmingen 552126 MHCII-APCefluor780 بيوليجند 107628 CD3-PE-cy5 VWR 55-0031-U100 CD19-PE-cy5 العلوم البيولوجية الإلكترونية 15-0193-83 CD11b-V450 BD Pharmingen 560455 Ly6G-AF700 بيوليجند 127621 حبات العد المطلق لايف تكنولوجيز أوروبا بي في سي 36950 مضاد ل CD16 / CD32 BD Pharmingen 553142 لوحة تخزين 96 بئر 340 ميكرولتر صقر 353263 V-bottom ، بولي بروبيلين طبيعي مقياس التدفق الخلوي BD Biosciences قسطر BD Biosciences 393202