اختبار الفحم أجار ريزازورين لتقييم نشاط مركب الاختبار ضد البكتيريا الفطرية

الملخص

المصدر: Gold ، B. et al. ، تصور مقايسة Charcoal Agar Resazurin لتعداد البكتيريا الفطرية شبه الكمي والمتوسط الإنتاجية. J. Vis. Exp. (2016)

يعرض هذا الفيديو اختبار Charcoal Agar Resazurin Assay (CARA) لتقييم نشاط المركبات المضادة للميكروبات ضد المتفطرة السلية. يساعد CARA في تقييم فعالية هذه المركبات من خلال قياس تأثيرها على نمو البكتيريا والتمييز بين التأثيرات المضادة للجراثيم والجراثيم.

البروتوكول

1. إعداد فحوصات MIC₉₀ المتماثلة وغير المتماثلة

1. تلقيح M. السل ، M. bovis BCG أو M. smegmatis في OD₅₈₀ من 0.01-0.1 والتوسع إلى منتصف مرحلة السجل (OD₅₈₀ ~ 0.5) في Middlebrook 7H9-ADN (Middlebrook 7H9 يحتوي على 0.2٪ جلسرين ، 0.2٪ سكر العنب ، 0.5٪ ألبومين ، و 0.085٪ كلوريد الصوديوم) أو 7H9-OADC (ميدلبروك 7H9 يحتوي على 0.2٪ جلسرين و 10٪ مكمل OADC).
2. تنمو M. tuberculosis و M. bovis BCG ك~ 20 مل من المزارع الدائمة في قوارير زراعة الخلايا و M. smegmatis مع الاهتزاز في البولي بروبيلين دائري القاع (ثقافة 4 مل) أو 50 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية (10....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: تخطيطي لمرق مقايسة MIC₉₀ و CARA مع النتائج المتوقعة. يتم عرض كل من نتائج MIC₉₀ و CARA ل 8 أنشطة محتملة. الترميز اللوني لآبار الصفائح الدقيقة MIC₉₀ أبيض (بدون نمو) وبني (نمو) ، وبالنسبة للألواح الدقيقة CARA أسود (بدون تألق) ووردي (مضان ريسوروفين). البيانات افتراضية.

....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ميدلبروك 7H9 بيكتون ديكنسون هاتف: 271310 ميدلبروك 7H11 بيكتون ديكنسون هاتف: 298810 ميدلبروك OADC بيكتون ديكنسون 212351 BSA ، صدمة حرارية روش 3118958001 الفحم المنشط سيغما PBS و Dulbecco's Ca2 + و Mg2 + مجانا تقنيات الحياة / Invitrogen 14190-144 توين 80 سيغما ص 8074 ريفامبيسين سيغما R3501 6-برومو-1H-إندازول-3-أمين ألفا إيسار إتش34095 فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة سيغما ب0662 كبريتات المغنيسيوم ، سباعي الهيدرات سيغما M1880 سترات الأمونيوم الحديديك سيغما F5879 كبريتات الزنك ، سباعي الهيدرات سيغما Z0251 كلوريد الأمونيوم سيغما أ 9434 حمض الزبد ، سائل سيغما B103500 مسحوق ريزازورين سيغما R7017 كلوريد الصوديوم جي تي بيكر 4058-01 محلول ريزازورين محضر إنفيتروجين DAL1100 مقياس الطيف الضوئي الأجهزة الجزيئية م 5 96 بئر ، صفائح دقيقة معالجة بزراعة الأنسجة كورنينج 3595 خزانات الكاشف VWR 89094-678 أكياس بلاستيكية قابلة لإعادة الإغلاق VWR 395-94602 14 مل أنابيب البولي بروبلين المستديرة القاع كورنينج 352059 أنبوب الطرد المركزي المخروطي 50 مل كورنينج 352070 75 سم² قارورة زراعة الخلايا كورنينج 431464 وحدة