Method Article

تحليل العلاقة المستضدية بين الفيروسات باستخدام مقايسة التحييد الدقيق المستندة إلى الصور

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Lin، Y.، et al. تحسين مقايسة التحييد الدقيق الكمي. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو مقايسة التحييد الدقيق المستندة إلى التصوير لتحليل العلاقات المستضدية بين فيروسات الأنفلونزا A و B. يوفر طريقة كمية ومرئية لتقييم فعالية الأجسام المضادة أو العلاجات الأخرى في الوقاية من العدوى الفيروسية.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. معايرة الفيروس

ملاحظة: اعتمادا على عدد الفيروسات وعدد التكرارات ، يمكن إعداد لوحة بئر مع المرونة التالية: (1) يمكن ترتيب التخفيف الفيروسي على طول الصفوف أو الأعمدة (الشكل 1). يجب أن يشغل كل فيروس صفا / عمودا منفصلا. (2) زيادة التخفيف الفيروسي مرنة ، ولكن يجب أن تبدأ بأعلى تركيز فيروسي في الزاوية العلوية اليسرى. (3) لا توجد قيود على عدد التكرارات.

  1. Aliquot ما يكفي من خلايا MDCK أو خلايا MDCK-SIAT8 في ألواح 96 بئرا (200 ميكرولتر / بئر). احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 لمدة 2 أو 3 أيام للوصول إلى التقاء. نشر الخلايا في DMEM المكمل بمصل ربل....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: مثال على إعداد لوحة البئر في تجربة معايرة الفيروس. يتم تعيين فيروسات الاختبار لصفوف منفصلة (من A إلى H). تم تصميم الأعمدة للتخفيفات الفيروسية المختلفة (من 1 إلى 12). تم استخدام عمودين كنسخ مكررة لكل تخفيف فيروسي. شريط المقياس = 10 مم.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments VGM سيغما D6429 ، P0781 500 مل DMEM + 5 مل قلم / ستريب برنامج تلفزيوني أ الطبيعة درجة الحموضة محلول ملحي مخزن بالفوسفات: كلوريد الصوديوم 10 جم ، كلوريد كلوريد الصوديوم 0.25 جم ، Na2HPO4 1.437 جم ، KH2PO4 0.25 جم ، وحي الماء 1 لتر أفيسيل إف إم سي RC-581F 2.4 جم في 100 مل من الماء المقطر المذاب عن طريق التحريك على محرك مغناطيسي لمدة 1 ساعة. تعقيم عن طريق التعقيم 2x DMEM جيبكو 21935-028 التربسين سيغما تي 1426 تراكب (10 مل / طبق): 5 مل 2 × DMEM ، التربسين 2 ميكروغرام / مل التركيز النهائي ، أفيسيل 5 مل تريتون X- 100 ه سيغما تي 8787 المخزن المؤقت للنفاذية: 0.2٪ في PBS A (حجم / حجم) توين 80 سيغما ص 5188 المخزن المؤقت للغسيل: 0.05٪ Tween 80 في PBS A (حجم / حجم) مصل الحصان مختبرات PAA المحدودة ب 15-021 المخزن المؤقت ELISA: 10٪ في PBS A (حجم حجمي / حجم) + 0.1٪ Tween 80 الفأر MAb ضد الأنفلونزا من النوع A بيوراد MCA 400 1 الأجسام المضادة: 1: 1,000 في ELISA Buffer الماعز المضادة للفأر IgG (H + L) HRP مترافقة بيوراد 172-1011 2 الأجسام المضادة: 1: 1,000 في ELISA Buffer الركيزة الحقيقية بلو بيروكسيداز KPL 50-78-02 المادة المتفاعلة: أزرق حقيقي + 0.03٪ H2O2 جم (1: 1،000 من محلول 30٪) ألواح ميكروتيتر مسطحة القاع سعة 96 بئر كوستار 3596 ريال 8 قنوات غسالة لوحة متعددة الجدران ومشعب سيغما M2656 الماسح الضوئي لوحة الكمال إبسون V750 برو يمكن تنزيل برنامج التصوير مجانا من http://www.epson.com/cgi-bin/ Store / support / supDetail.jsp? oid = 66134 &infoType = Downloads. بيئة تشغيل البرمجيات: LabVIEW المؤسسة الوطنية للأدوات نافذة قائمة على NI Vision builder الإصدار: LabVIEW2012 أو أعلى

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Micro neutralization AssayVirus NeutralizationAntigenic RelationshipInfluenza VirusReceptor destroying EnzymeSerial DilutionCell MonolayerOverlay TechniqueVirus infected CellsNeutralization Titer

Related Articles