تقييم الإمكانات المضادة للميكروبات للعزلات البكتيرية البرازية المنتجة للبكتيريا الفئران

الملخص

المصدر: Bäuerl, C., et al. طريقة لتقييم تأثيرات البكتيريا على ميكروبات الأمعاء للفئران. J. Vis. Exp. (2017).

يوضح هذا الفيديو الكشف عن بكتيريا حمض اللاكتيك المنتجة للبكتيريا المشتقة من براز الفأر. يحدد الاختبار النشاط المضاد للميكروبات للبكتيريا على سلالات بكتيرية معينة.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. عد المختبر ونشاط البكتيريا

1. قم بوزن حبيبات براز واحدة من كل عينة في أنبوب سعة 1.5 مل وأضف حجما مناسبا من كلوريد الصوديوم المثلج 0.9٪ لتحقيق محلول 10٪ (وزن / حجم). استخدم مدقات دقيقة معقمة لأنابيب سعة 1.5 مل لتجانس معلق البراز وإعداد تخفيفات تسلسلية بمقدار عشرة أضعاف في كلوريد الصوديوم المثلج 0.9٪.
2. احسب العدد الإجمالي لخلايا LAB.
   1. نقل الخلايا المخففة (100 ميكرولتر) إلى 4 مل من Man Rogosa Sharpe (MRS) الناعمة (50 درجة مئوية ، 0.8٪ أجار). امزج عن طريق الدوامة قبل صب الخلايا على صفيحة أجار صلبة MRS (1.5٪ أجار).
   2. جفف اللوحة عن طريق إزالة الغطاء لمدة 5-10 دقائق في الغطاء المعقم قبل احتضان الخلايا لمدة 20-24 ساعة عند 30 درجة مئوية لنمو الخلايا وتكوين المستعمرة.
3. عد الخلايا المنتجة للبكتيريا.
   1. نقل الخلايا المخففة (100 ميكرولتر) من منتج البكتيريا إلى 4 مل من أجار اللينة MRS الدافئة مسبقا (50 درجة مئوية ، 0.8٪ أجار) ، وتخلط عن طريق الدوامة ، وتصب الخلايا على صفيحة أجار MRS (1.5٪ أجار) ؛ يشار إلى هذه الطبقة باسم الطبقة الأولى.
   2. انقل 4 مل أخرى من MRS الأجار الناعم الخالي من الخلايا (0.8٪ أجار) إلى الطبقة الأولى لتضمين جميع الخلايا داخل الأجار الناعم.
      ملاحظه: تهدف هذه الطبقة إلى منع الخلايا من النمو كمستعمرات على سطح ألواح الأجار. يتم إزاحة الخلايا التي تنمو على السطح بسهولة عند صب خلايا المؤشر في الأعلى (الخطوة 4.3.4) وبالتالي ستعقد تفسير النتائج. يشار إلى هذه الطبقة باسم الطبقة الثانية.
   3. جفف اللوحة عن طريق إزالة الغطاء لمدة 5-10 دقائق في الغطاء المعقم قبل الحضانة لمدة 20-24 ساعة عند 30 درجة مئوية لنمو الخلايا وتكوين المستعمرة.
   4. لتحديد المستعمرات المنتجة للبكتيريوسين ، امزج 40 ميكرولتر من ثقافة ليلية لسلالة مؤشر مناسبة ، مع 4 مل من الأجار الناعم الدافئ مسبقا. يسكب المزيج على الطبق. يشار إلى هذه الطبقة باسم الطبقة الثالثة.
   5. جفف اللوحة عن طريق إزالة الغطاء لمدة 5 - 10 دقائق في الغطاء المعقم قبل الحضانة لمدة 20-24 ساعة عند 30 درجة مئوية لنمو الخلايا وتكوين المستعمرة.
      ملاحظه: تحتوي المستعمرات المنتجة للبكتيريا على مناطق (تثبيط) واضحة حول المستعمرات (الشكل 1).

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: الكشف عن إنتاج البكتيريا في المختبر المستعاد من البراز بواسطة بروتوكول ثلاثي الطبقات (كما هو موضح في الإجراء)

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات طبق بتري بلاستيك الترمو: العلمية 101 في آر 20 مرق الدماغ والقلب كوندا 1400 أجار البكتريولوجية الأوروبية بروناديسا 1800 Agarose D1 Low EEO بروناديسا 8010 1x عازلة TAE الترمو: العلمية 15558042 مرق MRS ديفكو هاتف: 288130 أقراص PBS سيغما P4417-100TAB مِيزَان ميتلر توليدو PB602-S