مقايسة لوحة موضعية لتقييم استجابات الإجهاد التأكسدي في السلالات البكتيرية

الملخص

المصدر: Ketelboeter ، L. M. et al. ، طرق لتثبيط إنتاج البيوميلانين البكتيري وتحديد الزيادة المقابلة في الحساسية للإجهاد التأكسدي. J. Vis. exp. (2015)

يوضح هذا الفيديو مقايسة لوحة موضعية مصممة لتقييم استجابات الإجهاد التأكسدي للسلالات البكتيرية. تنتج بعض السلالات البيوميلانين ، وهو صبغة مضادة للأكسدة. على العكس من ذلك ، فإن السلالات المعالجة بعامل اختبار ، مما يؤدي إلى انخفاض إنتاج البيوميلانين ، تظهر قابلية متزايدة للإجهاد التأكسدي ، مما يؤدي إلى انخفاض قابلية الخلايا للحياة مقارنة بالسلالات المنتجة للبيوميلانين.

البروتوكول

فئة

1. تحضير وسائط الثقافة والمضادات الحيوية و 2- [2-nitro-4- (trifluoromethyl) benzoyl] -1،3-cyclohexanedione (NTBC)

1. اصنع مرق لوريا بيرتاني (LB) (1٪ تربتون ، 0.5٪ مستخلص خميرة ، 0.25٪ كلوريد الصوديوم ، كلوريد الصوديوم في H₂O) وتناول كميات مناسبة. تعقيم بواسطة الأوتوكلاف. يحفظ في درجة حرارة الغرفة.
2. اصنع 100 مل من أجار LB (1٪ تربتون ، 0.5٪ مستخلص خميرة ، 0.25٪ كلوريد الصوديوم ، 1.5٪ أجار في H₂O) في قوارير 250 مل. تعقيم بالأوتوكلاف وتخزينها في درجة حرارة الغرفة. تأكد من ذوبان الأجار قبل سكبه في أطباق.
   ملاحظه: ستنتج القوارير التي تحتوي على 100 مل من LB agar 4 أطباق. يمكن تغيير كمية LB أجار....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 2- [2-نيترو-4- (ثلاثي فلوروميثيل) بنزويل] -1،3-سيكلوهكسانيديون (NTBC) سيجما ألدريتش SML0269-50 ملغ وتسمى أيضا nitisinone. قابل للذوبان في DMSO. ح₂س₂ سيجما ألدريتش 216763-100 مل 30 بالوزن في H2O. استقرت.