Method Article

مقايسة الترميز الشريطي للتوصيف الظاهري والوظيفي للخلايا المناعية

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Baxter ، R. M. ، et al. تحليل خلية واحدة للنمط المناعي وإنتاج السيتوكين في الدم الكامل المحيطي عبر قياس الكتلة. J. Vis. Exp. (2018).

يسلط هذا الفيديو الضوء على طريقة بروتينية أحادية الخلية تستخدم الأجسام المضادة المترافقة بالمعادن الثقيلة للترميز الشريطي للخلية المميزة. بعد ذلك ، يتم تطبيق التلوين المناعي وقياس الكتلة الخلوية لتقييم التغيرات المناعية والوظيفية في الخلايا المناعية المشتقة من الدم البشري الكامل.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. الباركود لخلايا الدم المحللة / الثابتة

  1. قم بإذابة عينات الخلايا المحللة / الثابتة من التخزين -80 درجة مئوية ببطء على الجليد ؛ يمكن تمييز 20 عينة كحد أقصى برموز شريطية فريدة وتجميعها باستخدام هذا النظام. تمييع المخزن المؤقت لبيرم الترميز الشريطي 10X بمقدار 1:10 باستخدام PBS ؛ قم بعمل مخزن مؤقت كاف ل ~ 3 مل لكل عينة.
  2. املأ قاعا غير معقم ب CSM والآخر بمخزن مؤقت لتجعيد الترميز الشريطي 1X. أضف 1 مل من CSM المثلج إلى العينات المذابة حديثا ، واخلطها جيدا باستخدام ماصة ، وانقلها إلى أنابيب البولي بروبيلين العنقودية ذات العلامات المسماة مسبقا.
  3. خذ عينة سعة 10 ميكرولتر لحساب الخلايا باستخدام عداد الخلايا الآلي أو مقياس كثافة ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments ركسوليتينيب سانتا كروز الفئة SC-364729A مخزون conc: 10 ملم ؛ Conc النهائي: 5 ميكرومتر R848 إنفيفوجين TLRL-R848-5 مخزون Conc: 1 ميكروغرام / ميكرولتر ؛ Conc النهائي: 1 ميكروغرام / مل LPS-EK إنفيفوجين TLRL-EKLPS مخزون Conc: 1 ميكروغرام / ميكرولتر ؛ المسار النهائي: 0.1 ميكروغرام / مل معقم PBS لونزا 17-516 فهرنهايت Lyse/Fix Buffer BD العلوم البيولوجية 558049 مخزون Conc: 5X ؛ Conc النهائي: 1X (مخفف في ddH2O) BD Phosflow perm / الغسيل العازلة I BD العلوم البيولوجية 557885 مخزون Conc: 10X ؛ Conc النهائي: 1:10 (مخفف في ddH2O) RPMI جيبكو هاتف: 21870-076 أزيد الصوديوم (NaN3) سيجما ألدريتش إس 8032 سهم Conc:>99.9٪; المسار النهائي: 0.0002 مثبط نقل البروتين (PTI) العلوم البيولوجية الإلكترونية 00-4980-93 مخزون كونك: 500X ؛ المسار النهائي: 1X معترم الحمض النووي Fluidigm 201192 ب مخزون conc: 500 ميكرومتر ؛ Conc النهائي: 0.1 ميكرومتر MaxPar الباركود بيرم المخزن المؤقت Fluidigm 201057 مخزون Conc: 10X ؛ المسار النهائي: 1X مجموعة الباركود Pd 20-plex Fluidigm S0014 مخزون Conc: غير متاح ؛ Conc النهائي: غير متاح الأجسام المضادة المستخدمة في قياس الكتلة الخلوية علامات السطح CD1c بيوليجند L161 ميس: 161 CD3 دينار بحريني UCHT1 ميس: 144 CD4 بيوليجند سك 3 ميس: 174 CD7 دينار بحريني M-T701 ميس: 149 CD8 بيوليجند سك 1 ميس: 142 CD11b Fluidigm 44 ميس: 209 CD11c دينار بحريني ب 6 الكتلة: 152 CD15 دينار بحريني مرحبا 98 ميس: 115 CD14 بيوليجند م 5 إي 2 ميس: 154 CD16 العلوم البيولوجية الإلكترونية / الحرارة ب 73.1 ميس: 165 CD19 سانتا كروز SJ25C1 ميس: 163 CD21 بيوليجند بو32 ميس: 141 سي دي 27 دينار بحريني L128 ميس: 155 سي دي 38 Fluidigm تاريخ الوصول 2 ميس: 172 إجمالي CD45 بيوليجند مرحبا 30 ميس: 89 CD45RA بيوليجند مرحبا 100 مجسمة: 153 CD56 ميلتيني ريا 196 ميس: 168 سي دي 66 دينار بحريني B1.1 / CD66 ميس: 113 سي دي 86 Fluidigm it2.2 الكتلة: 150 CD123 Fluidigm 6 ساعات 6 ميس: 143 CD278 / ICOS بيوليجند C398.4A ميس: 156 CD179 / PD1 بيوليجند EH12.2H7 ميس: 162 IgD بيوليجند IA6-2 ميس: 146 غني إم بيوليجند MHM-88 ميس: 151 CXCR5 دينار بحريني RF8B2 ميس: 173 هلادر بيوليجند L243 ميس: 167 السيتوكينات IL-1α بيوليجند 364-3ب3-14 ميس: 147 IL-1β بيوليجند H1B-98 ميس: 169 IL-1RA سانتا كروز AS17 ميس: 157 IL-6 بيوليجند MQ2-13A5 الكتلة: 164 IL-8 دينار بحريني E8N1 ميس: 160 IL-12 / IL-23p40 بيوليجند C8.6 ميس: 171 IL-17A بيوليجند BL168 ميس: 148 IL23p19 العلوم البيولوجية الإلكترونية / الحرارة 23 دي سي دي بي مجسمة: 176 MIP1β دينار بحريني د21-1351 ميس: 158 MCP1 دينار بحريني 5D3-F7 ميس: 170 IFNα ميلتيني LT27:295 ميس: 175 IFNγ بيوليجند 4S.B3 ميس: 165 PTEN دينار بحريني أ 2 ب 1 مجسمة: 159 TNFα بيوليجند ماب 11 ميس: 166 ملاحظة: إذا تم ذكر الشركة المصنعة على أنها Fluidigm ، فقد تم شراء هذا الجسم المضاد من Fluidigm مع معدن مترافق مسبقا. إذا تم ذكر الشركة المصنعة على أنها غير Fluidigm ، فقد تم اقتران هذا الجسم المضاد ذاتيا باستخدام مجموعة وضع العلامات MaxPar Multi-Metal Kit (Fluidigm Cat: 201300) وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mass CytometryHeavy Metal IsotopesCell BarcodingImmune Cell AnalysisSurface Antigen StainingIntracellular Cytokine StainingPeripheral Whole BloodPhenotypic CharacterizationFunctional CharacterizationSingle cell Proteomics

Related Articles