تحليل تعكر لمراقبة التراكم الناجم عن الكولاجين للصفائح الدموية البشرية المعالجة مسبقا

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Molica ، F. et al. ، قياس التعكر على الصفائح الدموية المغسولة من قبل الإنسان: تأثير مثبط Pannexin1 Brilliant Blue FCF على التجميع الناجم عن الكولاجين.J. Vis. Exp.(2017)

يوضح هذا الفيديو تحليل التعكر لتقييم تراكم الصفائح الدموية الناجمة عن الكولاجين في الصفائح الدموية البشرية المعالجة مسبقا والمغسولة. تظهر آبار التحكم تراكما ناتجا عن الكولاجين ، في حين أن التركيز العالي من المثبطات يمنع قنوات Pannexin-1 ، وبالتالي يثبط تراكم الصفائح الدموية الناجم عن الكولاجين ، وهو ما يتضح من التعكر غير المتغير.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تشمل مشاركين بشريين وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرفاهية الإنسان وتمت مراجعتها من قبل مجلس المراجعة المؤسسية المحلي.

فئة

1. تحضير العازلة لجمع الدم البشري وعزل الصفائح الدموية المغسولة

1. تحضير محلول مائي سعة 100 مل من حمض السترات وسكر العنب (ACD) عن طريق إذابة 1.4 جم أحادي هيدرات حامض الستريك (C₆H₈O₇ • H₂O ، 66.6 mM) ، 2.5 جم ثلاثي سترات سيترات ثنائي هيدرات (Na₃C₆H₅O₇ • 2 H₂O ، 85 mM) و 2 جم من الجلوكوز اللامائي D (+). يبلغ الرقم الهيدروجيني للمحلول حوالي 4.5.
2. ....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: قياس التجميع. (أ) صورة تمثيلية للكوفيت الزجاجي (الذي يحتوي على مغناطيس تحريك) المستخدم في قياس التجميع. تظهر الكوفيت الموجودة على اليسار الصفائح الدموية المريحة بينما توضح الكوفيت الموجودة على اليمين مجاميع الصفائح الدموية بعد التنشيط الناجم عن الكولاجين. (ب) صورة تمثيلية لمقياس تجميع 8 آبار لقياسات التعكر. يشار إلى الآبار المستخدمة (علامة النجمة).......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أحادي هيدرات حامض الستريك (C6H8O7 * H2O) روث 5949-29-1 خطر تلف / تهيج العين ثنائي هيدرات سترات ثلاثي الصوديوم (Na3C6H5O7 * 2H2O) سيجما ألدريتش S1804 - د (+) - الجلوكوز سيجما ألدريتش G8270 - كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) سيجما ألدريتش S9888 - كلوريد البوتاسيوم (KCl) سيجما ألدريتش ص 9541 - بيكربونات الصوديوم (NaHCO3) سيجما ألدريتش إس 6014 - أحادي هيدرات فوسفات الصوديوم (NaH2PO4 * H2O) سيجما ألدريتش إس 9638 - سداسي هيدرات كلوريد المغنيسيوم (MgCl2 * 6H2O) سيجما ألدريتش M9272 - سداسي هيدرات كلوريد الكالسيوم (CaCl2 * 6H2O) سيجما ألدريتش 442909 خطر تلف / تهيج العين N-2-هيدروكسي إيثيل بيبيرازين-N-2-حمض السلفونيك الإيثان (Hepes) ثيرموفيشر العلمي 15630 [م] - ألبومين مصل الدم البشري CSL Behring 00257/374 - حمض الهيدروكلوريك سيجما ألدريتش 320331 تآكل ومهيج للجهاز التنفسي. يمكن أن يسبب أضرارا شديدة للجلد والعين. إيبندورف 5810 آر فيشر ساينتيك - - الهيبارين Drosspharm AG / SA 20810 البروستاسيكلين I2 (PGI2) كايمان 18220 - أبيراز من البطاطس سيجما ألدريتش أ6535 - الفيبرينوجين (هيموكومبليتان) CSL Behring HS 73466011 - مقياس الجلطة SD-Medical ابتكار SD TA8V - FCF الأزرق اللامع (ملح ثنائي الصوديوم Erioglaucine) سيجما ألدريتش 80717 ضار بالحياة المائية مع آثار طويلة الأمد (تجنب إطلاقه في البيئة) الكولاجين هورم ، نيكوميد - حمض الأراكيدونيك شركة بيو / داتا C / N 101297 - عداد الخلية Sysmex KX-21N سيسمكس ديجيتانا - - هيبس جيبكو هاتف: 15630-056 - كوفيت زجاجي ابتكار SD THCV1000 - أدوات التقليب المغناطيسية ابتكار SD THA100 -