مقايسة خلوية لتحديد العوامل المتفاعلة مع CXCR4

الملخص

المصدر: Claes، S. et al.، A اختبار تعبئة Ca²⁺ القائم على التألق الحركي لتحديد ناهضات المستقبلات المقترنة ببروتين G والمضادات والمغيرات الخيفية.J. Vis. Exp.(2018)

يوضح هذا الفيديو فحصا خلويا يتضمن خلايا الورم الأرومي الدبقي التي تعبر عن مستقبلات الكيموكين CXCR4. يستخدم الاختبار صبغة حساسة للكالسيوم لقياس التغيرات الفلورية عند تفاعل العامل ، مما يوفر نظرة ثاقبة لديناميكيات الإشارات الخلوية.

البروتوكول

ملاحظة: يتم تنفيذ جميع الخطوات الموضحة في القسمين 1 و 2 في ظل ظروف معقمة في خزانة التدفق الصفيحي.

1. صيانة U87. خلايا CD4.hCXCR4

1. قم بزراعة الخلايا في قوارير ثقافة T75 عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون₂ في حاضنة مرطبة.
   ملاحظه: خط الخلايا في المختبر المستخدم في هذا البروتوكول هو خط خلية الورم الأرومي الدبقي U87 يعبر بثبات عن مجموعة التمايز 4 (CD4) ومستقبلات الكيموكين CXC البشرية 4 (CXCR4) وقد تم وصفها سابقا. تتم مراقبة التعبير عن سطح الخلية ل CD4 و CXCR4 باستمرار عن طريق قياس التدفق الخلوي وتظل مستويات التعبير ثابتة بمرور الوقت (~ 100٪ خلايا CD4 ⁺ و ~ 100٪ CXCR4 ⁺). لا يدخل الوصف التفصيلي لتوليد خط الخلية المستخدم وإجراء قياس التدفق الخلوي للتحقيق في مستويات تعبير المستقبلات في نطاق هذا البروتوكول.
   1. خلايا الزراعة الفرعية عند التقاء 80-85٪. اسمح لجميع الكواشف بالوصول إلى درجة حرارة الغرفة (RT) قبل زراعة الخلايا.
   2. قم بإزالة وسط الثقافة المكيف من الخلايا واغسل الطبقة الأحادية للخلية مرة واحدة باستخدام 5 مل من المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS).
   3. أضف 3 مل من 0.25٪ حمض التربسين - إيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك (التربسين-EDTA) ووزعه بالتساوي على طبقة أحادية الخلية. ثم قم بإزالة التربسين EDTA الزائد واحتضانه لمدة تصل إلى 5 دقائق عند 37 درجة مئوية حتى تبدأ الخلايا في الانفصال.
   4. أضف 10 مل من وسط النمو الكامل الطازج (Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) + 10٪ مصل بقري الجنين (FBS) + 0.01 م 4- (2-هيدروكسي إيثيل) -1-بيبرازينيثان سلفونيك حمض (HEPES) + عوامل الاختيار المناسبة). أعد تعليق الخلايا عن طريق ماصتها برفق لأعلى ولأسفل. انقل معلق الخلية إلى أنبوب معقم سعة 50 مل.
   5. احسب عدد الخلايا القابلة للحياة باستخدام طريقة الاختيار. في حالة خلايا الورم الأرومي الدبقي U87 ، تصل الجدوى بشكل عام إلى ~ 100٪.
      ملاحظه: يمكن تحديد أرقام الخلايا بعدة طرق. نستخدم بشكل روتيني نظام تحليل الخلايا الآلي القائم على تلطيخ التريبان الأزرق (انظر جدول المواد) وفقا لإجراءات المناولة القياسية ، ولكن يجب أن تعمل الطرق الأخرى بشكل جيد.
   6. أضف 2 × 10 6 أو 3 × 10⁶ خلايا (قابلة للحياة) إلى الحجم النهائي البالغ 25 مل من وسط النمو الطازج في قارورة ثقافة T75 واحتضانها عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون (CO₂).
      ملاحظه: إذا تم استخدام 3 × 10⁶ خلايا ، فستصل الخلايا إلى 80-90٪ من التقاء بعد يومين. إذا تم استخدام 2 × 10⁶ خلايا ، فستصل إلى نفس التقاء بعد 3 أيام. يجب أولا تحديد معدل نمو الخلايا تجريبيا إذا تم استخدام خطوط خلايا أخرى.

< p class = "jove_title" >2. بذر الخلايا لمقايسة تعبئة Ca²⁺

1. في يوم مرور الخلية (اليوم 0) ، قم بتغطية ألواح البوليسترين ذات الجدران السوداء المكونة من 96 بئرا بقيعان شفافة (انظر جدول المواد) بمحلول جيلاتين 0.1٪ لتسهيل ارتباط الخلية. < / > ملاحظه: قد يتم حذف طلاء الألواح المكونة من 96 بئرا بالجيلاتين إذا تم استخدام الألواح المطلية مسبقا ، والتي تتوفر تجاريا (انظر جدول المواد). يوصى بتقييم استخدام الألواح المطلية مسبقا بدلا من الطلاء اليدوي لكل خط خلية قيد التحقيق قبل متابعة البروتوكول.
   1. قم بإعداد محلول الجيلاتين بإضافة 1 جم من الجيلاتين إلى 100 مل PBS للحصول على محلول 1٪. خفف بمقدار 10x مع PBS قبل الاستخدام مرة أخرى. لتحسين قابلية ذوبان الجيلاتين ، قم بتسخين المحلول إلى 37 درجة مئوية.
   2. أضف 100 ميكرولتر من محلول الجيلاتين 0.1٪ لكل بئر من الصفيحة المكونة من 96 بئرا باستخدام ماصة متعددة القنوات. احتضان لمدة 2 ساعة في RT.
2. في غضون ذلك ، قم بإعداد الخلايا للبذر في الصفيحة المطلية المكونة من 96 بئرا.
   1. افصل الخلايا عن قارورة الثقافة ، وأعد تعليقها في وسط النمو الطازج ، وعدها باستخدام طريقة تلطيخ التريبان الأزرق.
   2. قم بتدوير الخلايا في أنبوب سعة 50 مل لمدة 5 دقائق عند 400 × جم في RT.
   3. أعد تعليق الخلايا في وسط نمو جديد (DMEM + 10٪ FBS + 1٪ HEPES ، بدون مضادات حيوية) للحصول على كثافة خلية 0.1 × 10⁶ خلايا (قابلة للحياة) / مل.
3. قم بإزالة محلول الجيلاتين من الألواح ذات الجدران السوداء ذات القاع الشفاف عن طريق التقليب فوق اللوحة وتجفيفها على منديل ورقي. أضف 200 ميكرولتر / بئر PBS لإزالة الجيلاتين الزائد واقلب اللوحة مرة أخرى.
4. قم بتوزيع 200 ميكرولتر من تعليق الخلية (المقابل 0.2 × 10⁵ خلايا) لكل بئر في الصفيحة المكونة من 96 بئرا المطلية بالجيلاتين (من الآن فصاعدا ، سيشار إلى هذه اللوحة باسم "لوحة القياس").
5. احتضان اللوحة طوال الليل عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون (CO₂).

فئة

3. تحميل الخلايا بصبغة فلورية حساسة للكالسيوم²⁺

1. في اليوم 1 ، قم بإجراء اختبار تعبئة Ca²⁺ الفعلي ، بدءا من تحميل الخلايا المصنفة بصبغة الفلورسنت Ca^{2 +} الملزمة fluo-2 acetoxymethyl (fluo-2 AM).
   1. قم بإعداد المخزن المؤقت للفحص عن طريق إضافة 40 مل من HEPES (1 متر) إلى 200 مل من محلول الملح المتوازن من Hank (HBSS ، 10x ، بدون فينول أحمر ، بدون بيكربونات الصوديوم). أضف الماء عالي النقاء للحصول على حجم نهائي قدره 2 لتر وأضف 4 جم من ألبومين مصل الأبقار (BSA). قم بإذابة BSA عن طريق التحريك المغناطيسي. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.4 (باستخدام هيدروكسيد الصوديوم ، هيدروكسيد الصوديوم) وقم بتصفية المحلول. < / > ملاحظه: خلال جميع الخطوات التالية ، يتم استخدام نفس المخزن المؤقت ، المشار إليه باسم "المخزن المؤقت للمقايسة".
   2. قم بإعداد محلول مخزون (4 ملي مولار في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)) من صبغة الفلورسنت الحساسة للكالسيوم^{2 +} fluo-2 AM. تجنب التعرض المفرط للضوء. قم بإذابة 1 مجم فلو-2 صباحا (الوزن الجزيئي: 1،061 جم / مول) في 235.6 ميكرولتر DMSO.
   3. قم بإعداد حل عملي من fluo-2 AM. بالنسبة للوحة فحص واحدة مكونة من 96 بئر ، امزج 12.5 ميكرولتر من محلول مخزون fluo-2 AM (4 ملليمتر) و 12.5 ميكرولتر محلول بوليول خافض للتوتر السطحي غير أيوني (على سبيل المثال ، المتعدد f-127) (20٪ من الوزن / الحجم في DMSO ، انظر جدول المواد). أضف 22 ميكرولتر من هذا الخليط إلى 11 مل في أنبوب سعة 15 مل. التركيز النهائي ل fluo-2 AM هو 4 ميكرومتر.
      ملاحظه: يستخدم الفاعل بالسطح غير الأيوني كعامل تشتت لتحسين الذوبان المائي ل fluo-2 AM ، وبالتالي ، لتعزيز تحميل الخلايا. لإذابة المادة الخافضة للتوتر السطحي في DMSO ، قم بتسخين العينة عند 37 درجة مئوية واخلطها بانتظام للحصول على محلول متجانس.
   4. قم بإزالة وسط النمو من الخلايا المصنفة مسبقا في لوحة القياس المكونة من 96 بئرا عن طريق قلب اللوحة وتجفيفها على منشفة ورقية.
   5. أضف 100 ميكرولتر من محلول صبغة التحميل لكل بئر باستخدام ماصة متعددة القنوات واحتضانها لمدة 45 دقيقة في RT في الظلام.

< p class = "jove_title" >4. تحضير ألواح البولي بروبلين المكونة من 96 بئرا والتي تحتوي على Chemokine Ligand CXC chemokine ligand 12 (CXCL12) أو المركبات قيد التحقيق

1. احصل على ألواح البولي بروبيلين ذات القاع المستدير (PP) سعة 96 بئرا (انظر جدول المواد).
   1. اسمح لمحلول مخزون CXCL12 (1 مجم / مل) ومحلول مخزون المركبات قيد الفحص بالتوازن عند RT.
      ملاحظه: يتم تحضير محلول مخزون CXCL12 في ماء فائق النقاء مكمل بنسبة 0.01٪ Tween20 وتخزينه عند -20 درجة مئوية كحصص للاستخدام الواحد.
   2. قم بإعداد محلول مركز 5x من CXCL12 في مخزن مؤقت للفحص (250 نانوغرام / مل أي ما يعادل 31.25 نانومتر) وتخفيف مركز 5x لكل مركب (في المخزن المؤقت للفحص).
   3. قم بتوزيع محاليل المخزون في اللوحة المناسبة المكونة من 96 بئرا وفقا لتخطيط لوحة محدد مسبقا. قم بتوزيع 75 ميكرولتر / بئر في اللوحة التي تحتوي على CXCL12 ("صفيحة الكيموكين") ، وقم بتوزيع 50 ميكرولتر / بئر في اللوحة التي تحتوي على المركبات ("اللوحة المركبة").
      ملاحظه: سيتم أخيرا تخفيف كل من المركبات و CXCL12 5x عند الاستغناء عنها في لوحة القياس. من المهم أيضا تضمين آبار التحكم السلبية التي تحتوي فقط على عازلة الفحص في كل من اللوحة المركبة وكذلك لوحة الكيموكين. أيضا ، يجب تضمين آبار التحكم الإيجابية (أي الآبار التي تحتوي على CXCL12 في صفيحة الكيموكين ، ولكن مع مخزن مؤقت للفحص في الآبار المقابلة للوحة المركبة).

< p class = "jove_title" >5. إعدادات البروتوكول على قارئ الصفيحة الدقيقة الفلورية

ملاحظة: يشار إلى قارئ الصفيحة الدقيقة الفلورية المستخدم في هذا البروتوكول في جدول المواد.

1. قم بتشغيل وحدة التبريد الخاصة بقارئ اللوحة الفلورية أولا ، ثم قم بتشغيل قارئ التألق نفسه. دعه يبدأ لبضع دقائق وافتح برنامج النظام.
2. قم بإنشاء بروتوكول الفحص باستخدام قائمة السحب والإفلات التي تتضمن الخطوات التالية:
   1. في مربع "الإعدادات" ، حدد "Read_Mode" مع الطول الموجي للإثارة: 470-495 نانومتر ؛ والطول الموجي للانبعاث: 515-575 نانومتر.
      ملاحظه: الأطوال الموجية المحددة مناسبة للاستخدام مع صبغة fluo2 الحساسة للكالسيو².
   2. قم بتضمين مربع "المزج مع TF" (سائل النقل) للخلط التلقائي للمركبات في اللوحة المركبة ، والتي سيتم وضعها في موضع المصدر 2 للجهاز (انظر الخطوة 6.4). حدد 15 ميكرولتر من المحلول في كل بئر ليتم شفطه تلقائيا وخلطه ثلاث مرات. اضبط ارتفاع أطراف الماصة على 20 ميكرولتر تحت سطح السائل. اضبط سرعة الشفط والتوزيع على 50 ميكرولتر / ثانية
      ملاحظه: يشير ارتفاع أطراف الماصة إلى الحجم المتبقي أسفل أطراف الماصة. على سبيل المثال ، إذا كانت آبار الصفيحة المركبة تحتوي على 50 ميكرولتر ، فإن ارتفاع 30 ميكرولتر يعادل 20 ميكرولتر تحت سطح السائل. يمكن ضبط حجم المحلول المركب المأخوذ للخلط وسرعة الخلط وموضع أطراف الماصة أثناء الخلط وعدد دورات الخلط باستخدام البرنامج.
   3. في مربع "سائل النقل" ، حدد أنه سيتم نقل 20 ميكرولتر من كل بئر من الصفيحة المركبة إلى لوحة القياس. ضع أطراف الماصة على عمق 20 ميكرولتر تحت سطح السائل، أي على ارتفاع 30 ميكرولتر أثناء شفط المركبات وعلى ارتفاع 60 ميكرولتر أثناء التوزيع في لوحة القياس. اضبط سرعة الشفط على 50 ميكرولتر / ثانية وسرعة الاستغناء على 25 ميكرولتر / ثانية < br / > ملاحظه: تحتوي الصفيحة المركبة على 50 ميكرولتر من المحلول لكل بئر (انظر الخطوة 4.1.3) ، وبالتالي فإن ارتفاع 30 ميكرولتر يتوافق مع موضع 20 ميكرولتر تحت سطح السائل. ستحتوي لوحة القياس على 80 ميكرولتر من المخزن المؤقت للفحص لكل بئر (انظر الخطوة 6.3) ، وبالتالي فإن ارتفاع 60 ميكرولتر يتوافق مع موضع مماثل للأطراف.
   4. حدد الزر "القراءة باستخدام TF". خلال الفاصل الزمني الأول ، حدد 60 قراءة (قياسات الفلورسنت) مع فاصل قراءة قدره 1 ثانية. حدد أنه يتم تسجيل 10 قراءات قبل توزيع المركبات في لوحة القياس ، و 50 قراءة بعد ذلك. حدد الفاصل الزمني الثاني بفاصل زمني للقراءة يبلغ 30 ثانية و 18 قراءة.
      ملاحظه: خلال هذه الخطوة ، سيتم قياس التألق حركيا (في الفترات الزمنية المحددة) لمدة ~ 10 دقائق في المجموع.
   5. قم بتضمين زر "نصائح الغسيل" في البروتوكول ثلاث مرات. ضمن كل خطوة غسيل، حدد نوع السائل: السائل أ (ماء فائق النقاء) أو السائل ب (70٪ إيثانول)، وعدد دورات الغسيل (1)، وسرعة المضخة (سريع)، وعدد السكتات الدماغية (5) خلال كل خطوة غسيل. < / > ملاحظه: خلال خطوات الغسيل الأولى والأخيرة ، يتم استخدام السائل A ، وخلال خطوة الغسيل الثانية يتم استخدام السائل B.
   6. قم بتضمين وظيفة "إيقاف الماصة مؤقتا". اضبط الماصة على الإيقاف المؤقت لمدة 300 ثانية
      ملاحظه: من خلال تضمين هذه الخطوة في البروتوكول ، سيتوقف رأس الماصة ، المدمج في جهاز قارئ لوحة التألق ، لمدة 5 دقائق قبل متابعة البروتوكول.
   7. قم بتضمين مربع "Mix with TF" للسماح بالخلط التلقائي لمحلول CXCL12 في لوحة الكيموكين ، والتي سيتم وضعها في موضع المصدر 3 للجهاز (انظر الخطوة 6.4). حدد 15 ميكرولتر من المحلول في كل بئر ليتم شفطه تلقائيا وخلطه ثلاث مرات. أثناء الشفط والخلط، ضع أطراف الماصة على بعد 20 ميكرولتر تحت سطح السائل. تم ضبط سرعة الشفط والتوزيع على 50 ميكرولتر / ثانية.
      ملاحظه: على غرار الخطوة 5.2.2 ، يمكن ضبط هذه المعلمات.
   8. في مربع "سائل النقل" اللاحق ، حدد أنه سيتم نقل 25 ميكرولتر من كل بئر من صفيحة الكيموكين إلى لوحة القياس. ضع الأطراف 20 ميكرولتر تحت سطح السائل ، أي على ارتفاع 55 ميكرولتر أثناء الشفط من صفيحة الكيموكين التي تحتوي على 75 ميكرولتر / بئر (انظر الخطوة 4.1.3) ، وعلى ارتفاع 80 ميكرولتر أثناء الاستغناء في لوحة القياس. اضبط سرعة الشفط على 50 ميكرولتر / ثانية وسرعة الاستغناء على 25 ميكرولتر / ثانية.
   9. قم بتضمين زر "القراءة باستخدام TF". خلال الفاصل الزمني الأول، حدد 145 قراءة بفاصل زمني للقراءة يبلغ 1 ثانية. حدد أنه يتم تسجيل 5 قراءات قبل الاستغناء عن CXCL12 في لوحة القياس ، و 140 قراءة بعد ذلك. حدد الفاصل الزمني الثاني بفاصل زمني للقراءة يبلغ 6 ثوان وحدد 20 قراءة.
      ملاحظه: مجتمعة ، تم تسجيل 243 قراءة (قياسات الفلورسنت) طوال البروتوكول بأكمله: 78 في الخطوة 5.2.4 و 165 خلال الخطوة 5.2.9.
   10. على غرار الخطوة 5.2.5 ، قم بتضمين زر "غسل النصائح" ثلاث مرات في البروتوكول.
       ملاحظه: يسمح تضمين هذه الخطوة في نهاية البروتوكول بإمكانية إعادة استخدام النصائح لإجراء اختبار آخر دون الحاجة إلى تغيير النصائح.
3. اضبط درجة حرارة الجهاز على 37 درجة مئوية بالنقر فوق الزر "ضبط درجة حرارة المرحلة" وتحديد 37 درجة مئوية.

< p class = "jove_title" >6. تشغيل مقايسة التألق

1. بعد احتضان لوحة القياس بمخزن التحميل المؤقت لمدة 45 دقيقة (انظر الخطوة 3.1.5) ، قم بإزالة المخزن المؤقت عن طريق التقليب فوق اللوحة وتجفيفه على منديل.
2. اغسل الخلايا المصنفة بإضافة 150 ميكرولتر / بئر من مخزن الفحص واحتضانها لمدة دقيقتين.
3. قم بإزالة المخزن المؤقت مرة أخرى عن طريق التقليب فوق اللوحة. أضف 80 ميكرولتر/بئر من المخزن المؤقت للفحص باستخدام ماصة متعددة القنوات.
4. ضع جميع اللوحات في الجهاز في موضعها المناسب: اللوحة المركبة في موضع المصدر 2 ، ولوحة الكيموكين في موضع المصدر 3 ، ولوحة القياس في موضع القراءة. ضع صندوقا من النصائح السوداء في موضع النصائح المصدر 1. أغلق باب الجهاز واحتضنه لمدة 5 دقائق قبل متابعة البروتوكول.
5. حدد الزر "اختبار إشارة البروتوكول" لتحديد وحدات الضوء النسبي للخلفية (RLUs) وتباين التألق فوق اللوحة. ستظهر نافذة جديدة. حدد "إشارة الاختبار".
   ملاحظه: خلال هذه الخطوة، يتم تحديد وحدات RLU في الخلفية بواسطة كاميرا الجهاز المقترن بالشحن المكثف (ICCD)، والتي تم دمجها في حجرة البصريات لجهاز قارئ الفلورة. تنتج RLUs هذه عن إثارة الصبغة الحساسة ل Ca^{2 +} (fluo-2) بواسطة الثنائيات الباعثة للضوء (LEDs) (الطول الموجي لإخراج LED 470-495 نانومتر). قيم 8,000-10,000 RLUs مناسبة تماما لهذا التطبيق. يمكن تكييف وحدات RLU، إذا لزم الأمر، عن طريق تغيير شدة الإثارة (حدد Exc. Intensity)، أو بوابة الكاميرا (حدد فتح البوابة). يجب أن يكون التباين على اللوحة أقل من 7.5٪.
6. حدد "تحديث" إذا تم الحصول على قيم خلفية تتراوح من 8,000 إلى 10,000 RLUs. احفظ البروتوكول الرئيسي بالنقر فوق حفظ زر.
   ملاحظه: من خلال القيام بذلك ، سيتم نقل الإعدادات من اختبار إشارة البروتوكول إلى البروتوكول الرئيسي.
7. قم بتشغيل الفحص بالضغط على زر "RUN".

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات فلو -2 صباحا أبكام أب142775 صبغة حساسة من الفلورسنت Ca2 + بلورونيك F-127 سيغما P2443-250G حمض البلورونيك الجيلاتين سيغما جي 9391 AMD3100 سيغما أ 5602-5 ملغ مضاد CXCR4 محدد مارافيروك هدية طيبة من AnorMed الدواء المضاد للفيروسات القهقرية ، مضاد CCR5 ليجند كيموكين CXCL12 بيبروتك 300-28 أ ترابط كيموكين CCL5 بيبروتك 300-06 مصل الأبقار الجنينية (FBS) جيبكو (تقنيات الحياة) 10270-106 ألبومين مصل الأبقار (BSA) سيغما أ1933-25 جي وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM) جيبكو (تقنيات الحياة) 41965-039 HBSS (10 x) ، كالسيوم ، مغنيسيوم ، بدون فينول أحمر جيبكو (تقنيات الحياة) 14065-049 هيبس (1 م) جيبكو (تقنيات الحياة) هاتف: 15630-056 التربسين EDTA (0,25٪) ، أحمر الفينول جيبكو (تقنيات الحياة) هاتف: 25200-056 محلول ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco (DPBS) جيبكو (تقنيات الحياة) 14190-094 أنابيب الصقر، 50 مل غرينر بيو ون 227 261 قارورة زراعة الأنسجة (T75) كورنينج 353024 صفيحة سوداء ، 96 بئر ، قاع شفاف ، مع غطاء كوستار / فيشر العلمي 10530753 لوحة الفحص (96 بئر) ، لبذر الخلايا ألواح البولي بروبلين (PP) العلم الحراري (VWR) 732-2661 الألواح المستخدمة في تحضير الألواح المركبة وألواح الكيموكين ، قاع دائري نظام الفحص الخلوي عالي الإنتاجية FLIPR Tetra الأجهزة الجزيئية قارئ لوحة الفلورسنت مع رأس ماصة مدمج وكاميرا ICCD وحدة فليبر تترا LED 470 - 495 نانومتر الأجهزة الجزيئية 0200-6128 الثنائيات الباعثة للضوء لإثارة الصبغة الحساسة Ca2 + الفلورية فلتر انبعاث FLIPR Tetra 515 - 575 نانومتر الأجهزة الجزيئية 0200-6203 مرشح انبعاث متوافق مع صبغة الفلورسنت فليبر تيترا 96 رأس الأجهزة الجزيئية 0310-4536 رأس ماصة 96 بئر، مدمج في قارئ الألواح الفلورية سكرين ووركس الأجهزة الجزيئية حزمة البرامج المستخدمة لتحليل البيانات والتصور على FLIPR Tetra خلية الخامسة بيكمان كولتر محلل بقاء الخلية Corning CellBIND 96 Well Flat Clear Bullet Black Polystyrene Microplates ، مع غطاء ، معقم كورنينج 3340 ريال لوحات فحص 96 بئر مطلية مسبقا والتي قد تمثل بديلا للطلاء اليدوي للوحة الفحص.