الكشف عن التلوث البكتيري باستخدام أجهزة الاستشعار النانوية المغناطيسية الفلورية

الملخص

المصدر: شيلبي ، ت. ، سولثانا ، إس ، مكافي ، جيه ، بانيرجي ، تي ، سانترا ، إس فحص مسببات الأمراض المنقولة بالغذاء باستخدام المستشعر النانوي المغناطيسي الفلوري: الكشف السريع عن الإشريكية القولونية O157: H7. J. Vis. Exp. (2017).

يوضح هذا الفيديو تقنية للكشف عن الملوثات البكتيرية في عينات الطعام والماء باستخدام أجهزة الاستشعار النانوية. يتم الكشف عن البكتيريا المسببة للأمراض المستهدفة من خلال مزيج من الطرائق الاسترخاء المغناطيسي وانبعاث التألق.

البروتوكول

1. الكشف السريع عن الإشريكية القولونية O157: H7 باستخدام MFnS

1. قم بتركيب محاليل PBS المختلفة (1X ، درجة الحموضة 7.4 ، 300 ميكرولتر) بكميات متزايدة من مخزون البكتيريا ^10-6 ، مما يؤدي إلى يتراوح CFU من 1-100. أضف كمية ثابتة من MFnS (100 ميكرولتر) إلى هذه الحلول.
2. قم بإنشاء حل أساسي واحد يحتوي فقط على PBS (1X ، pH 7.4 ، 300 μL) و MFnS (100 μL).
3. احتضن المحاليل لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية ثم اتركها لتبرد إلى درجة حرارة الغرفة.
4. انقل المحاليل الفردية إلى مقياس الاسترخاء المغناطيسي (0.47 تسلا) وسجل التغييرات في أوقات الاسترخاء (T2) بالنسبة إلى CFUs في كل محلول.
   1. لتسجيل التغييرات في قيم T2، ابدأ بقياس قيمة T2 للحل الأساسي الذي يحتوي فقط على PBS وMFnS.
      1. ضع المحلول في مقياس الاسترخاء المغناطيسي. افتح البرنامج المعني ، وحدد إعداد "T2 relaxation" ، واضغط على "قياس".
      2. بعد جمع خط الأساس T2 ، قم بقياس T2 قيم المحاليل الإضافية التي تم رفعها بتركيزات مختلفة من البكتيريا.
         ملاحظه: التغيير في T2 يعادل خط الأساس T2 مطروحا من T2 المسننة.
5. قم بإزالة العينات من مقياس الاسترخاء المغناطيسي وقم بالطرد المركزي للأنابيب عند 2880 × جم لمدة 10 دقائق.
6. صب المادة الطافية وإعادة تعليق الكريات البكتيرية في 100 ميكرولتر من PBS (1X ، درجة الحموضة 7.4).
7. أضف 80 ميكرولتر من كل إعادة تعليق إلى لوحة ذات 96 بئرا وسجل شدة التألق عند 595 نانومتر
   ملاحظه: يمكن تكرار الاختبار باستخدام مذيبات مختلفة ، بما في ذلك مياه البحيرة والحليب وغيرها ، كما هو موضح في قسم النتائج.

المواد