فحص في المختبر لتقييم تأثير الأجسام المضادة على المبيضات الاستوائية الحيوية

الملخص

المصدر: Chandley، P.، et al. اختبار اختزال قائم على التيترازوليوم قابل للذوبان لتقييم تأثير الأجسام المضادة على الأغشية الحيوية المبيضات الاستوائية. J. Vis. Exp. (2022).

يوضح هذا الفيديو تقنية في المختبر لدراسة تأثير الأجسام المضادة على الأغشية الحيوية الفطرية. يفرز الفطر الممرض المبيضات الاستوائية عامل ضراوة يفرز بروتيناز الأسبارياز 2 (Sap2) ، مما يسهل تكوين الأغشية الحيوية. عند إدخال مصل معطل بالحرارة يحتوي على أجسام مضادة خاصة ب Sap2 تمنع نضوج الأغشية الحيوية ، يتم تقييم صلاحية الخلايا الفطرية باستخدام مقايسة كروموجينيك.

البروتوكول

ص الفئة = "jove_title" >1. ج. تكوين الأغشية الحيوية الاستوائية

1. قم بإعداد أغشية المبيضات الحيوية في صفيحة ميكروتيتر البوليسترين ذات القاع المسطح المكونة من 96 بئرا كما هو موضح سابقا (الشكل 1).
2. أضف 100 ميكرولتر من مزرعة C. tropicalis (من 10⁶ خلايا / مل مخزون ، محضرة على النحو الوارد أعلاه) إلى صفيحة ميكروتيتر 96 بئرا باستخدام ماصة متعددة القنوات (الشكل 2 أ). احتفظ بالعمودين الأخيرين (11 و 12) كعناصر تحكم سلبية "لا يوجد فطر بالإضافة إلى المصل" و "لا فطر ولا مصل" عن طريق عدم إضافة الخلايا الفطرية. املأ العمودين 11 و 12 ب 100 ميكرولتر من وسط حمض مورفولين بروبان سل....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: تصوير المبيضات الاستوائية الأغشية الحيوية.(أ) تصور الأغشية الحيوية المبيضات الاستوائية التي تشكلت في قاع صفيحة ميكروتيتر مكونة من 96 بئرا بعد إزالة وسط RPMI ، باستخدام مجهر مقلوب. تم التقاط الصورة باستخدام الفحص المجهري للحقل الساطع (لم يتم استخدام أي بقعة). (ب) تصور C. tropicalis الأغشية الحيوية التي تشكلت في قاع صفيحة .......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 15 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية بي دي فالكون 546021 1x برنامج تلفزيوني - محضر في المختبر كلوريد الصوديوم : 4 جم
KCl: 0.1 جم
Na₂HPO₄: 0.72 جم
KH₂PO₄: 0.12 g
ماء 500 مل. اضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 50 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية بي دي فالكون 546041 96 بئر لوحات ميكروتيتر نونك 442404 حاضنه العامه مينادون سيغما م 5625 قارئ لوحة Microtiter العامه ماصة متعددة القنوات وأطراف العامه أطباق بتري تارسون 460090 رينجرز لاكتات - محضر في المختبر كلوريد الصوديوم 0.6 جرام لاكتات الصوديوم 0.312 جرام كلوريد البوتاسيوم 0.035 جرام كلوريد الكالسيوم 0.027 جرام ماء 100 مل. اضبط على درجة الحموضة 7.0 RPMI 1640 ماسح هايميديا AT180 XTT إنفيتروجين إكس 6493