تقنية كروماتوغرافيا التقارب لتنقية الأجسام المضادة وحيدة النسيلة

الملخص

المصدر: Elgundi، Z.، et al. إنتاج وتنقية الجسم المضاد العلاجي على نطاق المختبر. J. Vis. Exp. (2017).

يوضح هذا الفيديو تقنية لتنقية الأجسام المضادة وحيدة النسيلة من المادة الطافية المزروعة التي تم الحصول عليها من مزرعة الخلايا المنتجة للأجسام المضادة. تتضمن العملية استخدام مصفوفة من حبات الاغاروز المتشابكة مع البروتين A المترافق ، والذي يشل حركة الأجسام المضادة في المادة الطافية على الخرز ، مما يسمح بالفصل الفعال عن الملوثات. من خلال تطبيق مخزن مؤقت للشطف مع درجة حموضة منخفضة ، يتم تخفيف تفاعل الجسم المضاد للبروتين A ، مما يسهل جمع الكسور المحتوية على الأجسام المضادة.

البروتوكول

فئة

1. تنقية الأجسام المضادة عن طريق كروماتوغرافيا التقارب باستخدام نظام كروماتوغرافيا السائل السريع للبروتين الآلي (FPLC)

ملاحظة: يمكن تطبيق الإجراء التالي بشكل عام على معظم الأنظمة الآلية. يمكن إجراء التنقية في درجة حرارة الغرفة أو عند 4 درجات مئوية (إذا تم الاحتفاظ بنظام FPLC في غرفة باردة). يمكن إجراء سلسلة من اختبارات الاستكشاف لتحديد ظروف التنقية المثلى بما في ذلك مصفوفة العمود المناسبة ، ومخزن الربط ، ومخزن الشطف ، ودرجة الحموضة لضمان أقصى قدر من الاسترداد للأجسام المضادة المنقاة من الوسائط المكيفة (راجع قسم النتائج). تعتمد الظروف المثلى على الجسم المضاد أو البروتين الذي يتم تنقيةه. تم إجراء عمليات التنقي....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أقراص محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، درجة الحموضة 7.4 ، 100 مل 09-2051-100 علم نجمي هاي تراب بروتين A عالي الأداء، عمود 1 × 5 مل GE17-0403-01 سيجما ألدريتش AKTAجهاز تنقية الهواء 100 28406266 جنرال إلكتريك للرعاية الصحية نظام FPLC الآلي ، والذي يمكن أن يشمل مضخة عينة P-960 ومجمع كسور Frac-920. جلايسين حمض الهيدروكلوريك جي 2879 سيجما ألدريتش حامض الستريك ، أحادي الهيدرات BIOC2123 علم نجمي سترات الصوديوم ، ثنائي هيدرات ملح ثلاثي الصوديوم BIOCB0035 علم نجمي 1 م محلول Tris-HCl الرقم الهيدروجيني 9.0 BIOSD8146 علم نجمي مرشحات الطرد المركزي Amicon Ultra (30 MWCO) UFC803008 / UFC903008 ميرك ميليبور تستخدم للتخزين المؤقت للتبادل وتركيز البروتين المنقى. مجموعة فحص حمض بيرس بيسنشونينيك (BCA) هاتف: 23227 ثيرمو فيشر العلمي نظام BLItz 45-5000 فورتيبيو أداة تستخدم لقياسات قياس تداخل الطبقة الحيوية (BLI). المستشعرات الحيوية للبروتين أ 18-5010 فورتيبيو