Method Article

تقنية تلطيخ التألق المناعي للكشف عن تكوين الخلايا العصبية في الحصين لدى البالغين

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Ansorg، A.، et al. الكيمياء المناعية ووضع العلامات المتعددة بالأجسام المضادة من نفس النوع المضيف لدراسة تكوين الخلايا العصبية في الحصين البالغين. J. Vis. Exp. (2015)

يوضح الفيديو طريقة تلطيخ التألق المناعي المستخدمة لفحص تكوين الخلايا العصبية في الحصين البالغ. في البداية ، يخضع قسم دماغ الفأر للعلاج بالأجسام المضادة الأولية الموجهة إلى بروتينات العلامة المرتبطة بتكوين الخلايا العصبية في الخلايا السلفية العصبية. بعد ذلك ، يتم تصنيفها بأجسام مضادة ثانوية موسومة بالفلوروفورات. ثم تتم ملاحظة قسم الدماغ تحت المجهر متحد البؤر للتمييز بين الأنواع الفرعية المختلفة من الخلايا السلفية ، بناء على أنماط التعبير عن مجموعات متميزة من بروتينات الواسم.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< ص الفئة = "jove_title">1. تحضير الأنسجة

  1. تحضير 4٪ فورمالديهايد في 0.1 M من الفوسفات المخزن الهيدروجيني 7.4 في اليوم السابق للتروية. يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية.
  2. قم بنشر الفئران المخدرة بعمق عبر القلب (3.5٪ إيزوفلوران) عبر البطين الأيسر بمحلول ملحي مخمول بالفوسفات المثلج (PBS) ، ثم ب 40 مل من الفورمالديهايد المثلج (معدل التدفق 5 مل / دقيقة). قم بتشريح الدماغ وقم بإصلاحه بعد ذلك في نفس المثبت لمدة 24 ساعة عند 4 درجات مئوية.
  3. انقل الأدمغة على التوالي إلى 10٪ (24 ساعة عند 4 درجات مئوية) و 30٪....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1. رسم تخطيطي لنقل شرائح ميكروتوم إلى طبق 24 بئرا. ابدأ من A1 وضع الشرائح اللاحقة في الصف A ؛ بعد A6 ، انتقل إلى الصف التالي B ، وهكذا دواليك. عند الوصول إلى D6 ، ارجع إلى A1 واستمر. يسمح ترتيب الشرائح هذا بالقياس الكميلكل قسم n من الدماغ بأكمله. لتقدير الخلايا حديثي الولادة ، خذ كل 6أقسام دماغية (أي ما يعادل محتوى عمود واحد) ؛ للتنميط الظاهري للتأمل المناعي ، خ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments تحضير الأنسجة إيزوفلوران أكتافيس بيرامال للرعاية الصحية 700211 مسحوق بارافورمالدهيد (PFA) ريدل دي هاين 16005 سامة وقابلة للاشتعال مضخة التروية PD5206 أدوات هايدولف 523-52060-00 أنابيب مختبر Masterflex Tygon ، Ø 0.8 مم ثيرمو فيشر العلمي 06409-13 إبرة الرضاعة، مستقيمة، 21 جم، رأس زيتون 1.75 مم، 40 مم أنثوس 1036 تجميد ميكروتوم ميكروم HM 400 ثيرمو فيشر العلمي 24-بئر زراعة الخلية لوحات متعددة الآبار غرينر بيو ون 662160 [م] الكيمياء المناعية باخرة تيفال فيتاكوزن تيفال في إس 4001 إدراج غشاء شبكي من البوليستر Netwell مقاس 24 مم كورنينج 3479 محملة مسبقا في ألواح ثقافة 6 آبار إدراج غشاء شبكي من البوليستر Netwell مقاس 15 مم كورنينج 3477 محملة مسبقا في ألواح استزراع 12 بئرا طقم ناقل بلاستيك Netwell 6 آبار كورنينج 3521 لإدراج غشاء شبكي بوليستر 24 مم طقم ناقل بلاستيك Netwell 12 بئر كورنينج 3520 لإدراج غشاء شبكي بوليستر 15 مم مجموعة Vectastain Elite ABC مختبرات ناقلات PK-6100 DAB (3،3 ′-هيدرات ديامينوبينزيدين رباعي هيدروكلوريد) سيجما ألدريتش د-5637 مادة مسرطنة وحساسة للضوء فلوروماونت-جي الجنوب الحيوي 0100-01 الأجسام المضادة الأولية أرنب IgG1 α-Ki67 أرنب α-GFAP ، AS-3-GF نوفوكاسترا / لايكا بيوأنظمة NCL-L-Ki67MM1 DAB 1: 400 / IF 1: 100 ؛ يتطلب استرجاع الحاتمة الماعز IgG (H + L) α-GFP الأنظمة المشبكية 173 002 09:20 الماوس IgG1 α-nestin الأجسام المضادة للأكرس R1091P 06:00 خنزير غينيا IgG (H + L) α-Doublecortin أبكام أب6142 1: 200 ؛ يتطلب استرجاع الحاتمة الفئران IgG2a α-BrdU (الاستسقاء) ميرك ميليبور أ ب 2253 09:20 الجرذ IgG2a α-BrdU (منقى) AbD سيروتيك / بيو راد OBT0030CX للكشف عن BrdU ؛ دب 1:500/إذا 1:400 الماوس IgG1κ α-BrdU AbD سيروتيك / بيو راد OBT0030 للكشف عن CldU ؛ DAB 1: 500 / IF 1: 250-400 الماوس IgG1 α-NeuN BD Biosciences 347580 للكشف عن IdU ؛ DAB 1:500/IF 1:350 الأجسام المضادة الثانوية ميرك ميليبور MAB377 09:20 حمار α خنزير غينيا IgG (H + L) - البيوتين حمار α الفئران IgG (H + L) - البيوتين ديانوفا 711-065-152 09:20 حمار α فأر IgG (H + L) - بيوتين ديانوفا 712-065-150 09:20 الماعز α الفئران IgG (H + L) - Alexa Fluor 488 ديانوفا 715-065-151 09:20 حمار α ماعز IgG (H + L) - Alexa Fluor 488 المجسات الجزيئية أ 11006 05:10 حمار α فأر IgG (H + L) -FITC ، فاب فرغينت المجسات الجزيئية أ 11055 05:10 حمار α ماوس IgG (H + L) - Alexa Fluor 647 ديانوفا 715-097-003 02:40 حمار α خنزير غينيا IgG (H + L) - Alexa Fluor 647 ديانوفا 715-605-151 05:10 حمار α الفئران IgG (H + L) - رودامين أحمر X ديانوفا 706-605-148 05:10 حمار α أرنب IgG (H + L) - رودامين أحمر - X ديانوفا 712-295-150 05:10 حمار α خنزير غينيا IgG (H + L) - رودامين أحمر - X ديانوفا 711-295-152 05:10 ستربتافيدين رودامين ريد إكس ديانوفا 706-296-148 05:10 الماعز α الأرانب IgG (H + L) - AMCA ديانوفا 016-290-084 09:20 هوشت: 33342 ديانوفا 111-155-144 1: 250 ، يعمل فقط مع الأرانب α-GFAP دابي المجسات الجزيئية H3570 17:40 حظر المجسات الجزيئية د1306 17:40 حمار فاب شظية α فأر IgG (H + L) حمار شظايا α أرنب IgG (H + L) ديانوفا 715-007-003 01:20 مصل الحمار العادي ديانوفا 711-007-003 01:20 مصل الأرانب العادي ميرك ميليبور S30 مصل الماعز العادي ديانوفا 011-000-010 ألبومين مصل الأبقار ديانوفا 005-000-001 علم الأنسجة سيجما ألدريتش أ 7906 كريسيل البنفسجي نيو كلير سيجما ألدريتش سي 5042 نيو ماونت ميرك ميليبور 109843 بديل الزيلين غير السام مجهريه ميرك ميليبور 109016 وسط تركيب دائم أكسيوسكوب 2 LSM 710 الفحص المجهري لكارل زايس الفحص المجهري لكارل زايس

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Immunofluorescence StainingAdult Hippocampal NeurogenesisConfocal MicroscopyPrimary Antibody CocktailFluorophore Labeled Secondary AntibodiesHost Species SerumMonovalent Fab FragmentsNeuronal Progenitor SubtypesMarker Protein ExpressionFluorescence Microscopy

Related Articles