الكشف عن الأجسام المضادة المضادة للجليكان المنتشرة باستخدام مصفوفة الجليكان المطبوعة

الملخص

المصدر: Olivera-Ardid، S. et al. ، مصفوفة الجليكان المطبوعة: تقنية حساسة لتحليل ذخيرة الأجسام المضادة المضادة للكربوهيدرات المنتشرة في الصغيرة.J. Vis. Exp.(2019)

يوضح هذا الفيديو تقنية مصفوفة الجليكان المطبوعة لتحليل الأجسام المضادة المضادة للجليكان المنتشرة في مصل الفأر. تتفاعل الأجسام المضادة في المصل مع جليكانات معينة على الرقاقة ، وهو ما يؤكده التلوين المناعي متبوعا بالمسح الفلوري.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على جمع العينات وفقا لإرشادات IRB الخاصة بالمعهد.

فئة

1. إنتاج رقائق السكر

1. إعداد المصفوفات الدقيقة
   1. اطبع الجليكان (50 ملم) والسكريات (10 ميكروغرام / مل) في محلول ملحي مخزن بالفوسفات 300 ملي مولار (PBS ، درجة الحموضة 8.5) في 6 مكررات على شرائح زجاجية مشتقة من N-hydroxysuccinimide ، باستخدام مصفوفة روبوتية غير متلامسة (حجم الإسقاط ~ 900 pL). تحتوي كل شريحة على 4 كتل مختلفة من المصفوفات الفرعية (الشكل 1 أ ، بالألوان) تتكرر 6 مرات. تتكون كل مصفوفة فرعية من 112 بقعة جليكان مختلفة ، بما في ذلك عناصر التحكم (8 صفوف × 14 عمودا) (الشك....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: التمثيل التخطيطي (ليس على نطاق واسع) لتكوين مصفوفة الجليكان وطباعتها وتحليلها.(أ) تم تطوير الرقائق الدقيقة المطبوعة بمكتبة تضم 419 هيكلا مختلفا من الجليكان ، متبوعا بالكشف باستخدام جسم مضاد ثانوي مناسب يحمل علامة فلورسنت. تحتوي كل شريحة على 4 كتل مختلفة من المصفوفات الفرعية (بالألوان) ، تتكرر 6 مرات. تتكون كل مصفوفة فرعية من 112 بقعة جليكان مختلفة (8 صفوف × 14 عمو.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات الاجسام المضاده الماعز البيوتينيل المضاد للإنسان Igs ثيرمو فيشر العلمي ، والثام ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية المرجع #: 31782 الماعز البيوتينيل المضاد للفأر IgM + IgG ثيرمو فيشر العلمي المرجع #: 31807 معدات المصفوفة الروبوتية sciFLEXARRAYER S5 Scienion AG ، برلين ، ألمانيا http://www.scienion.com/products/sciflexarrayer/ صينية البقع (غرفة حضانة الشريحة) Simport ، Beloeil ، مراقبة الجودة ، كندا المرجع #: M920-2 الطرد المركزي إيبندورف ، هامبورغ ، ألمانيا المرجع #: 5810 R الماصات جيلسون ، ميدلتون ، ويسكونسن ، الولايات المتحدة الأمريكية http://www.gilson.com/en/Pipette/ الماسح الضوئي للشرائح بيركين إلمر ، والثام ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية برنامج ScanArray GX Plus حاضنة الاهتزاز كول بارمر ، ستافوردشاير ، المملكة المتحدة المرجع #: SI50 العينات البيولوجية BALB / ج مصل الفئران هذه الورقة غير متاح تحضير الغلوبولين المناعي المركب (CIP) Immuno-Gem ، موسكو ، روسيا http://www.biomedservice.ru/price/goods/1/17531 المواد الكيميائية والكواشف والجليكان مكتبة جليكان معهد الكيمياء العضوية الحيوية (IBCh) ، موسكو ، روسيا غير متاح ألبومين مصل الأبقار (BSA) سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، المرجع #: A9418 الإيثانولامين سيجما ألدريتش المرجع #: 411000 توين 20 شركة ميرك للكيماويات وعلوم الحياة ، مدريد ، إسبانيا المرجع #: 655204 محلول ملحي مخزن بالفوسبات (PBS) VWR International Eurolab SL ، برشلونة ، إسبانيا المرجع #: E404 أزيد الصوديوم سيجما ألدريتش المرجع #: S2002 ستربتافيدين أليكسا فلور 555 مترافق ثيرمو فيشر العلمي المرجع #: S21381 Streptavidin Cy5 مترافق جنرال إلكتريك للرعاية الصحية ، ليتل تشالفونت ، باكينجهامشير ، المملكة المتحدة المرجع #: PA45001 المواد شرائح زجاجية مشتقة من N-hydroxysuccinimide H شوت نكستريون ، جينا ، ألمانيا المرجع #: 1070936 ورق ترشيح Whatman سيجما ألدريتش المرجع #: WHA10347509 أنابيب 1.5 مل إيبندورف المرجع #: 0030120086 البرامج والخوارزميات نظام تحليل المصفوفات الدقيقة ScanArray Express بيركين إلمر http://www.per
kinelmer.com/microarray