استخدام شطيرة ELISA لتحديد محتوى البروتين السكري المناعي في اللقاح

الملخص

المصدر: Jallet ، C. et al. ، اختبار ELISA في المختبر لتقييم فاعلية لقاح داء.J. Vis. Exp. (2020)

يعرض هذا الفيديو مقايسة الممتز المناعي غير المباشر المرتبط بالإنزيم أو مقايسة الالتقاط المناعي لساندويتش ELISA المصممة لتقييم مستويات البروتين السكري المناعي في اللقاحات. يتم تحضين لوحة الفحص ، التي تحتوي على أجسام مضادة خاصة بالبروتين السكري ، بعينات لقاح مخففة بشكل متسلسل ، بما في ذلك اللقاحات المرجعية والاختبارية ، متبوعة بالمقايسة المناعية لتحديد محتوى البروتين السكري في لقاح الاختبار.

البروتوكول

1. احتياطات أمنية

ملاحظة: هذه الطريقة قابلة للتطبيق على كل من فيروس داء الحي (RABV) واللقاح المعطل.

1. استخدم الممارسات المختبرية الجيدة وإجراءات السلامة.
2. ارتد معدات الحماية الشخصية المناسبة (PPE) بما في ذلك المعطف والقفازات والأقنعة والنظارات التي تستخدم لمرة واحدة وما إلى ذلك.
3. عندما يتم معايرة الفيروس الحي ، استخدم خزانة السلامة البيولوجية من الفئة الثانية.
   1. ضع في اعتبارك أي مادة ملامسة للعينات (الكواشف ، محاليل الغسيل ، إلخ) كمواد معدية.
   2. عالج المادة الملوثة عن طريق غمرها في محلول التبييض (2,5٪ من هيبوكلوريت الصوديوم) لمدة 30 دقيقة لإزالة التلوث.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات خزانة السلامة البيولوجية من الفئة الثانية ثيرموفيشر العلمي 10445753 في حالة معايرة الفيروس الحي ألواح شفافة مسطحة القاع مناعية غير معقمة 96 بئر ، 400 ميكرولتر ، MAXISORP ثيرموفيشر العلمي 439454 جيد للارتباط بالجسم المضاد المحمل تجهيز Labo مختبر البولي بروبلين الدخان هود ثيرموفيشر العلمي 12576606 لإعداد حامض الكبريتيك لوحة المناعة قوية
الامتزاز MAXISORP قاع مسطح
بئر F96 دوتشر 55303 جيد للارتباط بالجسم المضاد المحمل شريط ختم Microplate (100 ورقة) ثيرموفيشر العلمي 15036 [م] قارئ وضع واحد Microplate شروق الشمس تيكان حاضنة شاكر Microplate دوتشر 441504 غسالة Microplate Wellwash ثيرموفيشر العلمي 5165000 ماصة متعددة القنوات (30-300 ميكرولتر) 12 قناة ثيرموفيشر العلمي 4661180 نيوت الماصات أحادية القناة (المجموعة 2: Finnpipettes F2 0.2-2 ميكرولتر ميكرو ، 2-20 ميكرولتر ، 20-200 ميكرولتر & 100-1000 ميكرولتر) ثيرموفيشر العلمي 4700880