$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على جمع العينات وفقا لإرشادات IRB الخاصة بالمعهد.
1. المعلومات الأساسية للجنة الدراسات
ملاحظة: مستودع معلومات الحساسية في مختبر الدولة الرئيسي لأمراض الجهاز التنفسي (AIR-SKLRD) هو بنك مصل كبير تم إنشاؤه داخل معهد قوانغتشو لمستشفى الجهاز التنفسي (GIRH). بدأ AIR-SKLRD ، الذي بدأ في العقد الماضي ، في جمع وتخزين عينات المصل من المرضى الذين يعانون من أمراض الحساسية ومعلوماتهم السريرية (الجدول 1). أجريت الدراسة الحالية باستخدام مصل من AIR-SKLRD.
- ابحث في قاعدة بيانات AIR-SKLRD عن الأمصال التي تم جمعها من يناير 2015 إلى يونيو 2018 وحدد المرضى الذين يعانون من أمراض الحساسية الذين وجد أنهم حساسون لمسببات الحساسية الشائعة في المنطقة.
- تأكد من أن جميع المرضى المختارين يعانون من أمراض مرتبطة بالحساسية ، مثل التهاب الأنف التحسسي و / أو الربو ، والتهاب الجلد التحسسي ، و / أو الشرى ، وأن مصل هؤلاء المرضى يحتوي على العديد من تحسسات الغلوبولين المناعي E (sIgE) الخاصة بمسببات الحساسية في المصل لمسببات الحساسية الشائعة في هذه المنطقة ، والتي تم اكتشافها بواسطة النظام 1.
- استبعاد المرضى الذين لديهم سجلات طبية غير مكتملة، أو أولئك الذين فقدوا المتابعة، أو أولئك الذين يرفضون إعطاء موافقة مستنيرة بشأن استخدام عينات مصلهم لأغراض علمية، أو أولئك الذين يعانون من نقص مناعي محدد، أو أولئك الذين يتلقون حاليا العلاج المناعي أو العوامل المعدلة للمناعة، أو أولئك الذين يتبين إصابتهم بعدوى طفيلية.
- التأكد من عدم إعطاء أي علاج أو وصفة دوائية قبل جمع المصل لتقليل التداخل مع النتائج المختبرية. تم رفض جميع عينات المصل التي لم تستوف المعايير.
< p class = "jove_title" >
2. دراسة التدفق وقياسات الاهتمام
< p class = "jove_content" >
ملاحظة: يحتاج نظام الموائع الدقيقة إلى 100 ميكرولتر من المصل لتحديد 19 مسببا للحساسية. تم جمع الدم الوريدي (5 مل) من كل مريض باستخدام وعاء دموي مفرغ يحتوي على جل منفصل. بعد الطرد المركزي لمدة 10 دقائق عند 1,000 ×
جم ، تم جمع الطبقة العليا للاختبار. تم تخزين المصل غير المستخدم عند -80 درجة مئوية. قبل الاختبار ، تم الاحتفاظ بالمصل في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة ورج بخلاط دوامة. تم تجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة.
- اختبر في المقام الأول عينات المصل بحثا عن sIgEs لمسببات الحساسية الكاملة من Dermatophagoides pteronyssinus (d1) ، Dermatophagoides farinae (d2) ، Blomia tropicalis (d201) ، وبر القطط (e1) ، وبر (e5) ، عشب برمودا (g2) ، عشب تيموثي (g6) ، الصراصير (i6) ، الرشاشيات الدخانة (m3) ، المبيضات البيضاء(م 5) ، عشبة الرجيد (W1) ، بياض البيض (F1) ، الحليب (F2) ، القمح (F4) ، الفول السوداني (F13) ، فول الصويا (F14) ، اللوز (F20) ، السلطعون (F23) ، والروبيان (F24). اتبع التعليمات الواردة في القسم 3.
ملاحظة: تم تحديد sIgE باستخدام مجموعة مقايسة IgE الخاصة بمسببات الحساسية (انظر جدول المواد) وتم قياسها بواسطة محلل التلألؤ الكيميائي.
- اختر عشوائيا ثلاث عينات من بين العينات التي تحتوي على مصل كاف (900 ميكرولتر على الأقل) لدراسة التكاثر. مع الحفاظ على جميع الحالات دون تغيير ، قم بقياس الأمصال الثلاثة لمسببات الحساسية sIgEs يوميا لمدة 9 أيام متتالية (أي 100 × 9 = 900 ميكرولتر من المصل).
< p class = "jove_title" >
3. إجراء اختبار شبه الأتمتة لنظام الموائع الدقيقة
ملاحظة: يدمج النظام 2 تقنية الموائع الدقيقة الأوتوماتيكية ، والمصفوفات الدقيقة للبروتين ، وتحليل الضوء البارد ، وتحليل IgE المتوازي ، وتكنولوجيا معالجة الصور. ينقسم بروتوكول الاختبار إلى أربعة أجزاء: تحضير المعدات ، وتحميل العينات ، والحضانة ، والقياس.
- تحضير المعدات
- قم بتشغيل الكمبيوتر وطاقة المحلل.
ملاحظه: مفتاح الطاقة على يسار القاعدة.
- ابدأ برنامج LabIT على جهاز الكمبيوتر. إذا ظهرت نافذة تحذير الإطار الداكن ، فانقر فوق موافق لتشغيل اختبار التسرب. بعد ذلك ، انقر فوق الشعار المركزي للدخول إلى واجهة التشغيل.
ملاحظه: سيذكر النظام المستخدم بتشغيل اختبار التسرب إذا كان خاملا لأكثر من 24 ساعة.
- تحقق من درجة حرارة التفاعل و CCD (الجهاز المقترن بالشحن) درجة الحرارة في الزاوية اليمنى السفلية من الشاشة. يجب أن ترتفع درجة حرارة التفاعل إلى 37 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية في حوالي 10 دقائق ، ويجب أن تنخفض درجة حرارة CCD إلى -15 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية.
- قم بإجراء اختبار التسرب بعد انخفاض درجة حرارة CCD إلى -15 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية. قبل إجراء اختبار LEAK ، تأكد من عدم ترك أي عناصر أخرى داخل الجهاز وأغلق الباب. انقر فوق أدوات | اختبار النظام | اختبار التسرب. لا تفتح الباب أثناء الاختبار. عند انتهاء الاختبار، ستظهر نافذة التقرير.
- تحميل العينة
- أضف 620 ميكرولتر من محلول الغسيل ، و 120 ميكرولتر من المخزن المؤقت للحجب ، و 60 ميكرولتر من المترافقات A و B ، و 60 ميكرولتر من الركيزة A و B ، و 100 ميكرولتر من عينات المصل إلى خزان الكاشف المقابل على خرطوشة الموائع الدقيقة.
- حضانة المرض
- انقر فوق معرف الخرطوشة ، واستخدم ماسح الباركود لمسح الرقم التسلسلي للخرطوشة ضوئيا ، وأدخل معرف العينة ، ووضع الخرطوشة في المحلل ، وأغلق الباب ، وانقر فوق المحلل والتشغيل لبدء التحليل.
- قياس
- قم بتصدير النتائج إلى البرامج الإحصائية (على سبيل المثال ، Excel) بعد القياس.
ملاحظة: بعد 30 دقيقة من الحضانة ، يقوم المحلل تلقائيا بإجراء القياس والإبلاغ عن النتيجة.
< p class = "jove_content" >
الجدول 1: الخصائص الديموغرافية للمريض. في المجموع ، تم العثور على 293 شخصا استوفوا معايير التضمين ، بمتوسط عمر 23 (يتراوح العمر الربيعي من 8 إلى 36 عاما). من بينهم ، كان 170 (58.02٪) من الذكور و 123 (41.98٪) من الإناث. أيضا ، 92 (31.40٪) منهم يعانون من التهاب الأنف التحسسي ، و 117 (39.93٪) يعانون من الربو التحسسي ، و 36 (12.29٪) يعانون من أمراض مصاحبة لالتهاب الأنف والربو ، و 48 (16.38٪) يعانون من أمراض حساسية أخرى ، مثل حساسية الطعام أو حساسية الجلد.
نوعي
لا.( ٪)
الجنس، n (٪)
أنثى
123(41.98٪)
ذكر
170(58.02٪)
العمر ، السنة ، ن (٪)
المتوسط (25٪ ، 75٪)
23(8,36)
≤10
97(33.11٪)
11-20
37(12.63٪)
21-40
101(34.47٪)
>41
58(19.80٪)
التشخيص ، ن (٪)
التهاب الأنف التحسسي
92(31.40٪)
الربو التحسسي
117(39.93٪)
التهاب الأنف التحسسي مع الربو
36(12.29٪)
الاخرين
48(16.38٪)