التحليل القائم على قياس التدفق الخلوي لتنشيط الخلايا المتغصنة باستخدام المجمعات المناعية

الملخص

المصدر: Santana-Magal، N.، et al. بروتوكول عزل الخلايا المتغصنة المشتقة من الخلايا الأحادية للفأر وتنشيطها اللاحق في المختبر مع المجمعات المناعية للورم.J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لتقييم تنشيط الخلايا المتغصنة باستخدام الخلايا السرطانية المغلفة بالغلوبولين المناعي G (IgG). تستوعب الخلايا المتغصنة الخلايا السرطانية المغلفة ب IgG ، وتعالج مستضدات الورم ، وتقدمها على السطح من خلال جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير - II ، جنبا إلى جنب مع التعبير المشترك لجزيء التكلفة CD86. تخضع هذه الخلايا المتغصنة بعد ذلك لتحليل التلوين المناعي المستهدف ب MHC-II و CD86 وتحليل قياس التدفق الخلوي لتحديد حالة تنشيطها.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على جمع العينات وفقا لإرشادات IRB الخاصة بالمعهد.

فئة

1. عزل الخلايا المتغصنة المشتقة من الخلايا الوحيدة المرتبطة بالورم

1. في غطاء التدفق الصفحي ، قم بإزالة الأورام من الفئران التي تم قتلها رحيم بثاني أكسيد الكربون₂ وضع الأورام في وسط RPMI بدون مصل بقري الجنين (FBS).
   ملاحظه: يوصى بشدة بحلق الفئران ورشها بنسبة 70٪ من الإيثانول قبل إزالة الأورام لتقليل التلوث المحتمل من الفراء. تأكد من أن الورم لا يتجاوز 25-40 مم² لأن الأورام الأكبر حجما تحتوي على عدد أقل من الخلايا المتغصنة (DC) التي تميل إلى أن تكون هشة وعرضة للخضوع لموت الخلايا. إذ....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات فيكول باك بريميوم جنرال إلكتريك للرعاية الصحية 17-5442-02 أوبتي بيرب تقنيات الخلايا الجذعية 7820 CD45 MicroBeads ميلتيني 130-052-301 طقم عزل EasySep Monocyte تقنيات الخلايا الجذعية 19861 كولاجيناز الرابع سيغما سي 9697-50 ملغ اختبر كل دفعة بحثا عن السموم الداخلية DNase I سيغما DN25-10 ملغ HBSS ثيرموفيشر 14025092 FBS ثيرموفيشر 16140071 اختبر كل دفعة بحثا عن السموم الداخلية PE-CD11c بيوليجند 117307 APC-CD11b بيوليجند 101211 بنفسجي لامع 650 MHCII بيوليجند 107641 AF48- CD86 بيوليجند 105017 APC / Cy7-Ly-C6 بيوليجند 108423 PE / Cy7-CD15 بيوليجند 135523