Method Article

طريقة قائمة على التألق المناعي لقياس إجهاد النسخ المتماثل في الخلايا السرطانية

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Ramakrishnan ، N. et al. ، قياس إجهاد النسخ المتماثل في خلايا سرطان المبيض باستخدام التألق المناعي للحمض النووي أحادي الشريطة.J. Vis. Exp. (2023)

يوضح الفيديو نهجا قائما على التألق المناعي لقياس إجهاد النسخ المتماثل في الخلايا السرطانية. تنتج الخلايا المعالجة بالهيدروكسي يوريا حمض نووي أحادي الشريطة ، يتم اكتشافه من خلال التألق المناعي. يشير عدد بؤر التألق الأخضر إلى مستوى إجهاد النسخ المتماثل في الخلايا السرطانية.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: تم استخدام خط خلايا سرطان المبيض ، OVCAR3 ، في هذه الخطوات ، ولكن هذا البروتوكول قابل للتطبيق على نطاق واسع على العديد من خطوط الخلايا الأخرى ، بما في ذلك تلك المشتقة من مصادر غير المبيض. يظهر مخطط للبروتوكول في الشكل 1.

< p class = "jove_title" >1. طلاء الخلايا

  1. اصنع أغطية مطلية ب poly-L-lysine.
    1. أضف أغطية معقمة بقطر 12 مم إلى أنبوب مخروطي سعة 50 مل بمحلول بولي إل ليسين ، وضعها على كرسي هزاز لمدة 15 دقيقة.
    2. استنشق المحلول في غطاء مزرعة الأنسجة. اغسل الغطاء بإضافة ماء معقم وضع الأنبوب الذي يحتوي على الغطاء مرة أخرى على الروك لمدة 5 دقائق. كرر خطوة الغسيل هذه ثلاث مرات.<....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: تخطيطي وضع العلامات على IdU.يتم نبض الخلايا باستخدام IdU لمضاعفة عدد السكان. إذا كانت هناك حاجة إلى أي علاج دوائي ، فيجب إعطاؤه بعد مضاعفة أول عدد من السكان في وجود IdU.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-2
الشكل 2: مقارنة بين إشارة البؤر التي تم الحصول عليها بعد ال.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments 3٪ بارافورمالدهيد (PFA) فيشر ساينتيك NC0179595 10 جم سكروز + 100 مل 10X PBS + ماء ليصل الحجم إلى 925 مل. أضف 75 مل 40٪ من PFA الخالي من الميثانول ، واخلطه ، واصنع حصصا من 50 مل قبل التخزين
التخزين: يحفظ في -20 درجة مئوية 5-يودو-2'-ديوكسيوريدين (IdU) سيجما ألدريتش I7125-5G ميغاواط = 354.10 جم / مول. لمخزون 10 ملليمتر: قم بإذابة 3.541 مجم IdU إلى 1 مل 1 نيوتن من الأمونيا السائلة الأجسام المضادة ل BrdU BD Biosciences 347580 التخزين: يحفظ في 4 درجات مئوية الجسم المضاد الثانوي Alexa Fluor Plus 488 المضاد للفأر الترمو: العلمية أ32766 حساسة للضوء - تحفظها في الظلام ألبومين مصل الأبقار (BSA) سيجما ألدريتش أ 7906-100 جرام مصنوع عن طريق إضافة كتلة محددة إلى حجم PBS
التخزين: يحفظ في 4 درجات مئوية زجاج الغطاء الدائري علوم المجهر الإلكتروني 72230-01 أوفكار 3 ATCC إتش تي بي-161 وسائط النمو: RPMI مكمل ب L-glutamine ، 0.01 مجم / مل من الأنسولين البقري ؛ مصل الأبقار الجنيني إلى تركيز نهائي بنسبة 20٪ و 1X Pen Strep
التخزين: وسائط التجميد: وسائط النمو + 5٪ DMSO ومخزنة في -80 درجة مئوية محلول بولي إل ليسين سيجما ألدريتش P4832-50 مل التخزين: يحفظ في 4 درجات مئوية ProLong Diamond Antifade Mountant مع DAPI الترمو: العلمية ص 36962 التخزين: يحفظ في 4 درجات مئوية التربسين EDTA ، 0.25٪ جينيسي العلمية 25-510 التخزين: يحفظ في 4 درجات مئوية ماء مفلتر معقم سيجما ألدريتش W3500-6X500ML التخزين: يحفظ في 4 درجات مئوية

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Replication StressImmunofluorescence MethodSingle Stranded DNAIdU DetectionCancer CellsFluorescence MicroscopyFoci CountingHydroxyurea TreatmentAnti IdU AntibodiesDAPI Staining

Related Articles