Method Article

طريقة تللوين مناعي متعددة الإرسال باستخدام الأجسام المضادة الأولية من نفس الأنواع المضيفة

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Lyu, Q., et al. الميكروويف والفلوروفور تيراميد للتلوين المناعي المتعدد على الغدة الكظرية للفأر - باستخدام الأجسام المضادة الأولية غير المترافقة من نفس الأنواع المضيفة. J. Vis. Exp. (2020).

يوضح هذا الفيديو فحصا لإجراء تلطيخ مناعي متعدد الإرسال باستخدام الأجسام المضادة الأولية من نفس الأنواع المضيفة. في هذه الطريقة ، يخضع قسم أنسجة الغدة الكظرية لعملية تلطيخ مناعي من خطوتين. في البداية ، يتم تلطيخ القسم بأجسام مضادة خاصة بعلامات في القشرة ، متبوعا بتجريد الجسم المضاد المرتبط وإعادة تلطيخه بالأجسام المضادة الخاصة بالعلامات في النخاع.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على جمع العينات وفقا لإرشادات IRB الخاصة بالمعهد.

< p class = "jove_title" >1. تلطيخ بالجسم المضاد الأول

  1. إزالة الشمع وإعادة ترطيب شرائح البارافين المثبتة بالفورمالين (FFPE) مع تخصيص 5 دقائق لكل خطوة من الخطوات التالية: الزيلين أو الكواشف المكافئة 3x ، 100٪ إيثانول 2x ، 95٪ إيثانول 1x ، 70٪ إيثانول 1x ، 50٪ إيثانول 1x ، والماء المقطر 2x.
    ملاحظه: يجب أن تظل الشرائح رطبة بدءا من خطوة إعادة الجفاف هذه حتى التركيب في الخطوة النهائية.
  2. لاسترجاع المستضد الاختياري ، ضع الشرائح في 275 مل من محلول سترات الصوديوم المغلي (10 ملي مولار ، الرقم الهيدروجيني = 6.0) لمدة 8 دقائق.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments مضاد للتلاشي تصاعد الوسط مختبرات ناقلات إتش -1000 الحمار البيوتينيل المضاد للفأر جاكسون إيمونو 715-066-151 1: 500 التخفيف الحمار البيوتينيل المضاد للأرانب جاكسون إيمونو 711-066-152 1: 500 التخفيف دابي بيو ليجند 422801 2 ميكروغرام / مل في الماء المقطر المجهر الفلوري دوي يدور 4 ستربتافيدين بيروكسيداز المترافق بالفجل جاكسون إيمونو 016-030-084 1: 1000 تخفيف فرن ميكروويف، 700 واط جنرال إلكتريك JEM3072DH1BB ماوس مضاد ل CYP2F2 سانتا كروز, الطراز SC-374540 1: 250 التخفيف الماوس المضاد ل TH سانتا كروز, SC-25269 1: 1000 تخفيف مصل الحمار العادي جاكسون إيمونو 017-000-121 مصل 2٪ في PBST أرنب مضاد ل 20α HSD كيرافاست، هب4002 1: 500 التخفيف أرنب مضاد ل 3βHSD متحول جينيك، KO607 1: 250 التخفيف أرنب مضاد TH نوفوس NB300-109 1: 1000 تخفيف أرنب مضاد β catenin أبكام، أب32572 1: 500 التخفيف ستربتافيدين بيروكسيداز الفجل الحار (SA-HRP) جاكسون إيمونو 016-303-084 1: 1000 تخفيف TSA Cy3 تيراميد بيركين إلمر SAT704B001EA 1: 100 التخفيف TSA فلورسين تيراميد بيركين إلمر SAT701001EA 1: 100 التخفيف

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Multiplex ImmunostainingPrimary AntibodiesFluorophore TyramideAntibody StrippingAdrenal TissueCortex MedullaMicrowave Antigen RetrievalStreptavidin PeroxidaseNuclear StainingFluorescence Microscopy

Related Articles