مقالة منهجية

التصوير المناعي المتعدد الإرسال لتحليل مجموعات الخلايا التائية المقاومة للعلاج المناعي

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Granier ، C. ، et al. تحليل التألق المناعي متعدد الإرسال والقياس الكمي للخلايا التائية PD-1 + Tim-3 + CD8 + داخل الورم. J. Vis. Exp. (2018).

يوضح هذا الفيديو تقنية تصوير متعدد الأطياف الفلورية في الموقع لتحليل مجموعات سكانية فرعية مختلفة من الخلايا التائية المتسللة في أنسجة الورم. يتم علاج تشريح أنسجة سرطان الخلايا الكلوية بالتبريد بالأجسام المضادة لتسمية خلايا CD8 + T التي تعبر عن مستقبلات مثبطة محددة وتظهر نمطا ظاهريا مقاوما للعلاج المناعي. يتم تصور القسم المسمى باستخدام مجهر متعدد الأطياف لتحديد المجموعات السكانية الفرعية المميزة للخلايا التائية CD8 +.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على جمع العينات وفقا لإرشادات IRB الخاصة بالمعهد

< p class = "jove_title" >1. تلطيخ التألق المناعي في الموقع للخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs)

  1. المبادئ التوجيهية الإجرائية
    1. قم بتنفيذ جميع الخطوات التجريبية في درجة حرارة الغرفة.
    2. لجميع الخطوات ، قم بإجراء التخفيفات باستخدام Tris Buffer Saline (TBS ؛ انظر جدول المواد).
    3. قم بإجراء الغسيل في TBS لجميع الخطوات باستثناء بعد حضانة الجسم المضاد الأساسي. بالنسبة للأخير ، استخدم Tris Buffer Saline Tween20 (TBST ، انظر جدول المواد). للاطلاع على تكوين المخزن المؤقت وإعادة ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
الشكل 1: تلغيم مناعي CD8-PD-1-Tim-3 على أنسجة مدمجة في البارافين في اللوزتين. تم اختيار أقسام الأنسجة المضمنة في البارافين بدلا من الأقسام المحفوظة بالتبريد للتلوين المناعي الثلاثي. بعد إزالة الشمع وإعادة الترطيب ، تم تطبيق نفس بروتوكول التلوين الذي تم تطويره مسبقا للأقسام المحفوظة بالتبريد. توجد خلايا CD8 + T خارج المركز الجرثومي ، وتتجمع الخلايا التائية غير CD8 + التي تعبر عن PD-1 في المركز الجرثوم.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Vectra 3 التصوير الآلي لعلم الأمراض الكمي بيركين إلمر CLS142338 تحليل خلية المعلومات 2.1. بيركين إلمر CLS135781 برنامج R https://www.r-project.org قلم تحديد Dakopen داكو S2002 تريس بافر سالين TBS أقراص تاكارا ، بيو إنك. TAKT9141Z الرقم الهيدروجيني 7.6 100 قرص تريس بافر سالين توين 20 تيرابايت (+ توين 20) تاكارا ، بيو إنك. TAKT9142Z درجة الحموضة 7.6 100 قرص نظام حجب البيوتين داكو إكس 0590 أفيدين 0.1٪ والبيوتين 0.01٪ مصل الحمار العادي جاكسون للأبحاث المناعية 017-000-001 5٪ حجم / حجم تركيز Fluoroshield مع DAPI سيجما ألدريتش F6057 تركيز 1.5 ميكروغرام / مل غطاء زجاجي محبوك Knittel Gläser, 100039 24 × 60 مم 100 زلات غطاء أرنب مضاد ل CD8 استنساخ P17-V نوفوس NBP1-79055 استخدم عند 4 ميكروغرام / مل الماوس المضاد ل PD-1 استنساخ NAT أبكام أب52587 استخدم عند 2 ميكروغرام / مل الماعز المضادة ل Tim-3 البحث والتطوير أيه إف 2365 استخدم عند 3 ميكروغرام / مل أرنب مضاد ل PD-L1 استنساخ SP142 روش 7309457001 استخدم عند 1 ميكروغرام / مل الماوس AF647 المسمى عموم الكيراتين C11 إشارات الخلية 4528 استخدم عند 0.5 ميكروغرام / مل الماعز المضاد للإنسان غال9 البحث والتطوير أيه إف 2045 استخدم عند 0.3 ميكروغرام / مل السماوي 5 الحمار المترافق المضاد للأرانب جاكسون للأبحاث المناعية 711-175-152 استخدم عند 5 ميكروغرام / مل البيوتينيل F (ab'2) حمار مضاد للفأر IgG جاكسون للأبحاث المناعية 715-066-150 استخدم عند 3 ميكروغرام / مل Alexa Fluor488 حمار مترافق مضاد للماعز IgG أبكام أب150133 استخدم عند 5 ميكروغرام / مل Cy3 المسمى ستربتافيدين أميرشام PA43001 استخدم عند 3 ميكروغرام / مل ماوس التحكم السلبي IgG1 داكو X0931 استخدم عند 2 ميكروغرام / مل IgG من مصل الماعز سيجما ألدريتش ط5256 استخدم عند 3 ميكروغرام / مل IgG من مصل الأرانب سيجما ألدريتش I5006 استخدم عند 4 ميكروغرام / مل

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

CD8 PD 1 Tim 3

مقالات ذات صلة